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knock2in 法建立 Cre 重组酶表达鼠系董 铭1 , knock2in 法建立 Cre 重组酶表达鼠系 董 铭1 , 于 澎2 , 饶明俐1 , 于 涌3 (11 吉林大学第一医院 神经内科 , 吉林 长春 130021 ; 21 吉林大学第二医院 眼科 , 吉林 长春 130023 ; 31 哈尔滨医科大学 , 黑龙江 哈尔滨 150086) [ 摘要 ] 目的 建立神经特异性表达的 Cre 重组酶鼠系 ,以便在特定的组织中 ,于某一特定的时间段 ,用条件性基 因剔除技术在活体状态下研究基因功能 。方法 用 knock - in 技术 ,以微小管相关蛋白 1a (Map la) 启动子控制 Cre 重组酶表达 。结果 PCR 检测结果表明 ,Cre 重组酶基因已成功植入该鼠系中 。结论 本研究为配合条件性基因 剔除技术 ,研究在脑神经细胞发育的后期各个相关基因的功能提供了一种新的手段 。 [ 关键词 ] Cre 重组酶 ;微小管相关蛋白 1a ; knock2in [ 中图分类号 ] Q784 [ 文献标识码 ] A [ 文章编号 ] 1000 - 1905 (2002) 01 - 0035 - 03 A mouse l ine that express Cre recombina se by gene knock - in strategy DONG Ming , YU Peng , RAO Ming2li , et al ( Department of Neurology , The First Hospital , J i L in University , Changchun 130021 , China) Abstract : Objective To generate a neuron specific mouse line that expresses Cre recombinase and to study the gene functions in a specific tissue and temporal period in vivo using conditional gene knock out . Methods Using the knock2in skill to express Cre recombinase under the control of murine microtubule associate protein 1a ( Map1a) gene promoter . Results One of the mouse lines expressed the Cre recombinase by PCR. Con2 clusion It will be a new tool for studying functions of genes during the late phase of brain nerve cells develop2 ment using conditional gene knock out strategy. Key words : Cre recombinase ;microtubule associate protein 1a ; knock - in Cre 重组酶表达 ,用 knock2in 技术建立了神经特异性 表达的 Cre 重组酶鼠系 ,以配合条件性基因剔除技 术 ,研究在脑神经细胞发育的后期各个相关基因的 功能 。 研究某一特定基因于活体情况下的功能时 ,基 因打靶技术无疑是首选 。不过 ,如果在剔除某一基 因之后 ,鼠在胚胎发育期即因此而死亡 ,那么 ,就不 能进一步研究该基因在成年和老年期的作用 。为克 服这个困难 ,条件性基因剔除技术应运而生 。P1 噬 菌体重组酶 Cre 可以识别含 34 个碱基对的 loxp 位 点 ,并在不需要任何辅助因子的情况下在此位点完 成酶切 。利用这个特点 ,把 loxp 位点导入目的靶基 因中 ,在适当的时间 ,用组织特异性表达启动子启动 Cre 表达 ,可以完成条件性基因剔除 ,并避免鼠在胚 胎发育期死亡 。微小管相关蛋白 1a ( microtubule as2 sociate protein 1a , Map1a) 是在神经系统特异性表达 的蛋白质 ,随着神经细胞的发育 ,Map1a 蛋白的表达 量逐渐增加 , 在成熟的神经细胞中 , 可以发现大量 Map1a 蛋白表达1 。我们用 Map1a 蛋白启动子控制 1 材料和方法 1. 1 Map1a Cre knock2in 载体构建 ①p FRT