氧化铝层析从云南红豆杉植物中转化提取紫杉醇.docx

氧化铝层析从云南红豆杉植物中转化 氧化铝层析从云南红豆杉植物中 转化提取紫杉醇3 张志强 苏志国 (中国科学院化工冶金研究所生化工程国家重点实验室 北京 100080) 摘 要 采用氧化铝层析从云南红豆杉植物浸膏中转化生成和分离提纯了紫杉醇。 考 察了氧化铝的类型、流动相中水和甲醇的添加、反应时间以及洗脱速度和洗脱剂组成等 层析操作条件对紫杉醇回收和分离的影响。研究表明, 采用碱性氧化铝柱层析分离和回 收紫杉醇效果显著, 通过对紫杉醇转化和分离条件的优化, 经一步氧化铝柱层析, 可以 使紫杉醇的含量从小于 110% 提高到大于 27% , 紫杉醇的回收率大于 170% 。 关键词 氧化铝层析, 紫杉醇, 提纯 紫杉醇的工业生产主要面临两个方面的难题: 一方面是紫杉醇资源问题, 即紫杉醇资源匮 乏, 红豆杉几乎是其唯一来源1, 2 , 寻找紫杉醇的资源是目前研究的一大热点; 另一方面是紫杉 醇在原料中含量低且与其它在结构和极性等方面极为相似的紫杉烷物质共存, 使分离提取困 难3 。 尽管紫杉醇的化学全合成及半合成均已获得成功, 但就临床供药而言, 紫杉醇目前主要 还是依靠从红豆杉植物中提取4 。 研究表明5 , 紫杉醇除了以游离态存在于植物体中外, 还常 常以结合态存在, 如 72木糖紫杉醇、72木糖基2102去已酰紫杉醇等。此外, 红豆杉植物中还存在 一些含紫杉醇核的紫杉醇类似物如 72表2紫杉醇、N 2去苯甲酰2N 2苯乙酰紫杉醇等。 如果能将 它们转化为游离的紫杉醇, 则可增加物料中紫杉醇的总量, 缓解紫杉醇资源的短缺。 近年来, 层析分离技术在植物天然产物提纯中显示出了巨大的潜力, 并逐渐成为了高纯天 然产物制备的主要手段。层析具有分离效率高、操作简单、便于工业放大等特点, 作为初分离手 段, 层析的缺点是价格较昂贵。因此, 为克服这一不足, 就应选用价廉、性能优越的层析介质。同 时, 考虑到分离原料往往是从植物体中直接浸泡出来的, 其中色素、蜡质及其它杂质含量很高, 因此要求介质对物料的处理量大, 而无机介质如氧化铝正具备这些优点。本文探索了应用氧化 铝层析, 一步从云南红豆杉中分离提纯紫杉醇和使紫杉醇类似物转化为紫杉醇, 取得了令人满 意的结果。 1 实验部分 1. 1 实验仪器与试剂 紫杉醇对照品, S igm a 公司, 纯度大于 98% 。红豆杉浸膏, 云南张峰植物加工厂。层析用氧 化铝 (200～ 300 目) , 上海新诚精细化学品有限公司。常压层析系统, P h a rm ac ia 公司。高效液相 色谱仪 (FL 2750) , B eckm an 公司。旋转蒸发器(X Z26A ) : 北京科龙仪器公司。甲醇及三氯甲烷 收稿日期: 1999208216 修回日期: 1999211223 3 国家自然科学基金重点项目资助(N o. (Suppo r ted by th e k ey P ro jec t o f C h ine se N a t io na l N a tu ra l Sc ience F und. N o. 天然产物研究与开发2V o 1. 12 N o. 3等溶剂 (分析纯) , 北京化工厂。1. 2 实验方法1. 2. 1 天然产物研究与开发 2 V o 1. 12 N o. 3 等溶剂 (分析纯) , 北京化工厂。 1. 2 实验方法 1. 2. 1 氧化铝柱层析 甲醇及三氯甲烷等溶剂用分子筛脱水, 层析用氧化铝在 190 ℃、1 托的真空下干燥 6 h , 用三氯甲烷充分浸泡, 超声波脱气 5 m in , 装成 15 mm ×250 mm 的层析 柱。三氯甲烷清洗柱后进料, 用三氯甲烷淋洗去未被吸附的杂质, 然后采用不同浓度的甲醇/三 氯甲烷进行洗脱, 收集洗脱出的紫杉醇峰, 用旋转蒸发器在 40～ 50 ℃蒸发, 从所得固体物中取 样, H PL C 测定其纯度。 层析柱用 100% 的甲醇再生备用。 紫杉醇样品的 H PL C 分析 称取 1～ 5 m g 紫杉醇样品, 用甲醇溶解于 5 m l 的容 1. 2. 2 量瓶中, 过滤。H PL C 柱为 4. 6 mm ×250 mm 的C 18 2硅胶柱, 流动相为甲醇/乙腈/水(25∶35∶ 40, V /V /V ) , 流速 1. 4 m l/m in , 227 nm 检测, 以紫杉醇标准品为对照, 外标法作定量分析。 2 结果与讨论 2. 1 氧化铝的酸碱性对分离的影响 根据生产工艺的不同, 层析用氧化铝可以有酸性、中性及碱性三种。 采用不同性质的氧化 铝从红豆杉浸膏中分离紫杉醇的结果如表 1。从表中数据可看到