金银花叶茎藤中黄酮与绿原酸同时提取分离工艺.docVIP

金银花叶茎藤中黄酮与绿原酸同时提取分离工艺 第32卷第5期 2011年9月 吉首大学(自然科学版) JournalofJishouUniversity(NaturalScienceEdition) Vo1.32No.5 Sept.2011 文章编号:1007—2985(2011)05—0091—04 金银花叶茎藤中黄酮与绿原酸同时提取分离工艺 罗悠,陈莉华,梁玄,黄浩,李彪,黄练 (吉首大学化学化工学院,湖南吉首416000) 摘要:超声辅助乙醇提取金银花叶茎藤中的绿原酸与黄酮,乙酸乙酯萃取分离黄酮与绿原酸,D101大孔树脂梯度洗 脱绿原酸与黄酮,乙醇及正己烷分相法纯化黄酮与绿原酸.结果表明,乙酸乙酯萃取可将金银花叶茎藤中的黄酮与绿原酸较 好的分离,经D101大孔树脂吸附,5O乙醇洗脱,浓缩过滤,沉淀用乙醇重结晶后得到的水溶型黄酮纯度达84.5;经 D101大孔树脂吸附,7O乙醇洗脱,浓缩干燥,pH值2.97条件下乙酸乙酯萃取,正己烷分相后,得到的绿原酸纯度达91. 2.方法已用于金银花叶藤中黄酮与绿原酸的同时提取,分离与纯化,结果满意. 关键词:金银花叶茎藤;黄酮;绿原酸;大孔树脂 中图分类号:06—332文献标志码:B 金银花为忍冬科多年生半常绿缠绕植物,又名忍冬花,银花,双花等,《中国药典》[1收载在药材及饮片部分,具有清热解 毒,凉热散风的功效[2].长期以来,金银花不仅广泛应用在医院临床和中成药生产中,同时还作为提取绿原酸的大宗工业原 料应用于工业生产中,其价格逐年攀升.而研究中对其枝叶的重视程度却不够,大量金银花的枝叶被视为非药用部位而弃 之.研究表明,金银花叶和金银花在临床上均有清热解毒之功效口].金银花叶茎藤中主要含有以下成分|3]:(1)黄酮类.金银 花叶茎藤的黄酮类化合物有木犀草素,忍冬苷等.(2)有机酸类.绿原酸类化合物是金银花叶的主要有效成分,包括绿原酸和 异绿原酸.同一时期的金银花叶中绿原酸类有效成分约为花的6O～7O.(3)多糖类.(4)粗蛋白,粗脂肪等营养物质.金 银花植株幼嫩枝叶粗蛋白高于23,粗脂肪高于47,适口性较好,牛,羊等牲畜喜食. 近5年来,金银花叶茎藤中绿原酸的提取仅见于文献E4],有少量文献关于叶中黄酮的提取口],尚未见对金银花叶茎 藤中黄酮,绿原酸,多糖的综合提取的研究报道.本研究将以系列文章探讨利用价格低廉的金银花叶茎藤进行黄酮,绿原酸, 多糖的联合提取并将残渣处理为饲料添加剂,为金银花叶叶茎藤资源化综合利用提供实验依据. 1实验部分 1.1仪器和试剂 UV75TCRT紫外分光光度计(日本岛津);KQ一250E超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);RH一201B—II旋转 蒸发仪(郑州长城科工贸有限公司);SHB一Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);pHS一25酸酸度计(上海 日岛科学仪器有限公司);DZF一6020真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司);HH—s恒温水浴锅(郑州长城科工贸有 限公司);层析柱;粉粹机. 芦丁标准品;绿原酸标准品(中国药品生物制品鉴定所);无水乙醇;石油醚;乙酸乙酯;正己烷;NaNO.;A1(NO.).; Na0H;HC1.以上实试剂均为分析纯.D101大孔树脂(安徽三星树脂科技有限公司). * 收稿日期:2011—07—22 基金项目:科技部科技型中小企业技术创新基金资助项目(10C26214302421);科技部科技型中小企业技术创新基金 资助项目(1lc26214305373);湘西自治州科技局2011年科技创新引导计划;吉首大学大学生研究性学习和创新性 实验计划项目(JSU—CX一2O11-44) 通讯作者:陈莉华(1961一),女,湖南吉首人,吉首大学化学化工学院教授,博士,主要从事天然产物生理活性成分的 提取及应用研究. 92吉首大学(自然科学版)第32卷 1.2实验方法 1.2.1大孔树脂的预处理取一定量的D101大孔树脂,先用95乙醇浸洗数次,每次24h,至浸洗液加适量的水无白色浑 浊现象止.用水反复清洗干净至无醇味,加入4倍体积2mol/L的NaOH溶液,浸泡12h,以水洗至中性.再加入4倍体积 量2mol/L的HCI溶液,浸泡12h,用水洗至中性备用. 1.2.2黄酮标准曲线以芦丁为黄酮对照品按照NaNOz—AI(NO.)s—NaOH法绘制标准曲线.测定样品溶液在510nm处的 吸光度值,以浓度(c)对吸光度(A)进行线性回归得回归方程为:c一0.0939A,R.一0.9998,浓度在0～0.05mg/mL之间 有良好的线性关系. 1.2.3绿原酸标准曲线精确称取绿原酸标准品5.1mg,95的乙醇定容至25mL,精密吸取1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,7.0 mL于25mL容量瓶中,加入45的乙醇定容至2