棉花细胞质雄性不育恢复基因的图位克隆.pdfVIP

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2019-08-14 发布于安徽
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棉花细胞质雄性不育恢复基因的图位克隆.pdf

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棉花细胞质雄性不育恢复基因的图位克隆 1．2位置效应引起的甲基化……………………………………………………24 2转录后水平基因沉默……………………………………………………………．24 2．1 RNAi作用机制……………………………………………………………25 2．2 RNAi的特征………………………………………………………………25 3基因沉默技术……………………………………………………………………．26 3．1 反义RNA技术……………………………………………………………．26 3．2 hpRNAi技术的兴起………………………………………………………26 3．3病毒诱导的基因沉默(VIGS)…………………………………………一27 3．4人工microRNA技术………………………………………………………27 3．5人工ta—si砌町A………………………………………………………………………………28 4新一代基因沉默技术的展望……………………………………………………．28 本研究目的和意义………………………………………………………………………．．31 第二部分研究报告第五章棉花CMS育性恢复基因的图位克隆…………………………………………．．33 l实验材料与方法……………………………………………………………………35 1．1 实验材料……………………………………………………………………35 1．2 BAC文库……………………………………………………………………36 1．3菌株和质粒…………………………………………………………………36 1．4酶和试剂……………………………………………………………………36 1．5 网络资源和应用软件………………………………………………………36 1．6引物…………………………………………………………………………37 2方法…………………………………………………………………………………………………………．38 2．1育性调查……………………………………………………………………38 2．2棉花基因组DNA提取方法………………………………………………39 2．3 CTAB法提取棉花总RNA及DNaseI消化……………………………．．40 2．4感受态细胞的制备及大肠杆菌的转化……………………………………41 2．5扩增产物的电泳、回收、克隆及测序……………………………………42 2．6农杆菌的制各和转化………………………………………………………43 2．7 VIGS步骤……………………………………………………………………．44 2．8 Q．PCR反应……………………………………………………………………．44 3结果与分析………………………………………………………………………．45 3．1 BCl群体、F2群体遗传分析和本实验研究基础………………………．45 万方数据目录 3．2对包含R刀位点BAC序列的分析………………………………………．45 3．3 对所有候选基因进行Q．PCR验证………………………………………．50 3，4 VIGS技术验证候选基因功能……………………………………………．54 3．5 0-613．2R和8518R中育性恢复基因的位置关系………………………．．58 4讨论………………………………………………………………………………………。58 4．1 PPR育性恢复基因在染色体上的分布……………………………………58 4．2棉花Rft基因是PPR基因家族成员……………………………………～58 4．3 恢复基因作用方式探讨……………………………………………………59 4，4 VIGS作用温度和时闻探讨………………………………………………．59 全文结论…………………………………………………………………………………．．6