维生素类药物的分析课件讲解.ppt

毛细管色谱柱选择 柱内径 特点 复杂样品分析 0.20mm 0.25mm 高柱效 高分离度 在分流模式下进行复杂样品分析 0.32mm 高分离度 较高柱容量 复杂样品，宽的浓度范围，可用分流、不分流和直接进样模式 0.53mm 较好分离度 很高的柱容量 最适合作纯度分析和痕量分析，直接进样，升级替代填充柱 样品容量与柱内径、膜厚及溶解度关系，记住相似相溶原理 一般厚膜柱适合分析低沸点样品；薄液膜适合分析高沸点化合物，同时固定相流失少。 检测器：主要有热导检测器（通用）、氢火焰离子化检测器、电子捕获检测器 样品→ dl－α－生育酚 固定相→十八烷基硅烷键合硅胶 流动相→甲醇-水（49 ：1） 检测波长→292nm R＞2.6 RSD≤0.8% （二）RP - HPLC法（外标法） （三）荧光分光光度法 对照品→ dl－α－生育酚 在220~400nm波长范围内，以发射、激发波长间隔Δλ为40nm扫描同步荧光光谱，测定同步荧光峰的荧光强度信号值。 VE= F样品 - F空白 F标准 - F空白 ?4.0（mg/L) 第六节 复方制剂中多种维生素的分析 一、离子对HPLC法测定多种维生素 以樟脑磺酸作为离子对试剂，以二巯基丙烷磺酸钠作为抗氧剂 二、反相HPLC法同时测定9种水溶性维生素 三、非水反相HPLC法同时测定4种脂溶性维生素 （三）高效液相色谱法 血浆中维生素C的测定(稳定性） 标准溶液包括样品预处理过程均需加入偏磷酸，偏磷酸同时可用于血样中的蛋白沉淀；当天取血当天测定；处理好的样品亦需冰箱保存 第四节 维生素D的分析 一、结构与性质 （一）结构 维生素 D2(麦角骨化醇) 维生素D3(胆骨化醇) 1.性状：无色针状结晶或白色结晶性粉末；无臭，无味。 2.溶解性：宜溶于有机溶剂，在植物油中略溶，在水中不溶。 3.不稳定性：含有多个烯键，所以极不稳定，宜氧化变质，效价降低，毒性增强。 （二）性质 4．旋光性 维生素D2 6个手性碳原子 维生素D3 5个手性碳原子 5．显色反应：甾类化合物 氯仿溶液 黄色 红色 紫色 绿色 6．紫外吸收特性：无水乙醇 265nm 醋酐 硫酸 二、鉴别试验 （一）显色反应 1．与醋酐-浓硫酸反应 氯仿溶液 黄色 红色 紫色 绿色 醋酐 硫酸 2．与三氯化锑反应 本品 1,2-二氯乙烷 三氯化锑试液 橙红色 粉红色 3．其它显色反应 维生素D 三氯化铁 橙黄色 二氯丙醇 乙酰氯 绿色 （二）比旋度鉴别 无水乙醇溶液 维生素D2 比旋度为＋102.5°至＋107.5° 维生素D3 比旋度为＋105°至＋112° （三）其它鉴别方法 薄层色谱法、HPLC法 制备衍生物测熔点 紫外、红外吸收光谱 （四）维生素D2、D3的区别反应 维生素D2 维生素D3 96%乙醇 10ml 取0.1ml 乙醇1ml 和85%硫酸5ml 红色λmax570nm 黄色 λmax495nm 三、杂质检查 （一）麦角甾醇的检查 维生素D290%乙醇溶液 洋地黄皂苷溶液 不得发生浑浊或沉淀 （二）前维生素D的光照产物 四、含量测定 正相高效液相色谱法 （一）维生素D测定法 含量以单位表示 每单位相当于维生素D 0.025μg 注意：计算的是维生素D及前维生素D经折 算成维生素D的总量 测定在半暗室及避免氧化的情况下进行 第一法：无干扰杂质 第二法：有VA及其他杂质干扰 第三法：用第二法时，前 VD峰受杂质干扰 仅VD峰可分离 第一法 内标物：邻苯二甲酸二甲酯 色谱条件及系统适用性试验： 填充剂：硅胶 流动相：正己烷-正戊醇（997：3） 检测波长：254nm 无干扰杂质 维生素D3 △ 光照 前维生素D3 反式维生素D3 维生素D3 速甾醇D3 与维生素D3的比保 留 时 间 分离度 ＞1.0　 ＞1.0 溶液组成 先后进样5次，维生素D3 峰面积的 RSD≤2.0 % 0.5 0.6 1.0 1.1 系统适用性试验 校正因子测定： 维生素D的校正因子: f1=Asmi/Aims 前维生素D折算成维生素D的校正因子: f2=（Asmr-f1msAr1）/（Ar2ms） 含量测定：计算维生素D及前维生素D折算成 维生素D的总量 mi=（f1Ai1+f2Ai2）ms/As 第二法 第一步：皂化提取 供试品 OH- 加热回流 冷却 乙醚提取 乙醚提取液 挥干乙醚 残渣 甲