发酵工程原理与技术第2章.pptVIP

第二章 发酵工业微生物菌种制备原理和技术 第一节 发酵工业微生物菌种的选育 微生物的特性及工业微生物的要求 发酵工业微生物菌种的分离和选育 发酵工业微生物菌种的退化、复壮与保藏 微生物的特性及工业微生物的要求 微生物的特性 微生物的特性及工业微生物的要求 工业化菌种的要求 微生物的特性及工业微生物的要求 工业化菌种的要求 工业生产常用的微生物 细菌（bacteria）：常用的有枯草芽孢杆菌、醋酸杆菌、棒状杆菌、短杆菌等。 酵母菌（yeast）：属单细胞真核生物，主要分布于含糖较多的酸性环境中。常用的有：啤酒酵母、假丝酵母、类酵母等。 工业生产常用的微生物 霉菌（mould）：喜偏酸性环境。可用于生产多种酶制剂、抗生素、有机酸及甾体激素等。 放线菌（actionmycetes）：原核微生物类群。在含有机质丰富的微碱性土壤中分布较为广泛。主要用于生产多种抗生素 工业生产常用的微生物 担子菌（basidiomycetes）：主要用于多糖、橡胶物质和抗癌药物的开发。 藻类（alga）：许多国家已把它作为人类保健食品和饲料。还可通过藻类将CO2转变为石油；国外还有从“藻类农场”获得氢能的报道。 发酵工业微生物菌种的分离和选育 微生物菌种的分离 微生物菌种的选育 微生物菌种的分离 施加选择性压力分离法 随机分离方法 施加选择压力的分离方法 富集培养 供给特殊培养基或加入某些抑制剂。 培养方法 分批式富集培养,连续富集培养 固体培养基 施加选择压力的分离方法 施加选择压力的分离方法 施加选择压力的分离方法 随机分离方法 随机分离方法--筛选 随机分离方法--筛选 微生物菌种的选育 微生物菌种的选育 自然突变 自然突变 互变异构效应 平衡倾向于酮式和氨基时，DNA双链中以AT和GC碱基对为主。 T以烯醇式出现，在DNA复制到达该点的一瞬间，与G配对； C以亚氨基出现时，在新合成的DNA单链的C点出现A 碱基对发生自然突变几率约10-8～10-9。 自然突变 自然选育 自然选育的优越性:简单易行,可以达到纯化菌种,防止菌种衰退,稳定生产,提高产量的目的. 缺点:效率低,进展慢,很难使生产水平大幅度提高. 诱变育种 诱变育种主要步骤 出发菌株诱变处理 几个应注意的问题 几个应注意的问题 几个应注意的问题 几个应注意的问题 突变体的筛选 初筛 特殊变异菌的筛选方法 高丝氨酸缺陷菌生产赖氨酸 营养缺陷型的筛选 淘汰野生型 检出缺陷型 鉴定缺陷型 淘汰野生型 抗生素法 菌丝过滤法 检出缺陷型 A夹层培养法 B逐个检出法 C影印培养法 夹层培养法 逐个检出法 影印培养法 鉴定缺陷型 生长谱法  营养缺陷型突变株的筛选方法 反馈抑制和反馈阻遏 抗反馈抑制和抗反馈阻遏突变株 结构基因突变，使结构酶无结合能力但有催化活性；末端产物的积累 调节基因或操纵基因突变 产生的阻遏蛋白与终产物不能结合或结合，但不发生作用；末端产物的积累 抗反馈阻遏和抗反馈抑制突变株筛选 方法： 末端产物结构类似物筛选； 未突变者死， 突变为抗者生并产菌落 营养缺陷型回复突变株筛选。 活性复，结构改变 组成酶和诱导酶 组成酶 微生物有些酶总是适量地存在,它们是不依赖 于酶底物或底物的结构类似物的存在而合成的酶,如葡萄糖转化为丙酮酸过程中的各种酶。 诱导酶 适应性酶,是依赖于某种底物或底物的结构类似物的存在而合成的酶。 大肠杆菌乳糖操纵子 诱导酶弊端 组成型突变株 突变发生在调节基因或操纵基因,解除对诱导物的依赖,可获组成型突变株。 少数情况下，组成型突变株可产生大量的、比亲本高的多的酶，这种突变株称为超产突变株。 组成型突变株筛选 筛选方法：设计条件使组成型优势生长，或通过菌落分辨。 　　①加诱导酶合成抑制物 　　②交替培养法 　　③显色反应法 组成型突变株筛选 组成型突变株筛选 ②交替培养法 含诱导物（乳糖）中培养——组成型快——不含诱导物（葡萄糖）中培养——诱导型失酶——反复。 组成型突变株筛选 ③显色反应法 不含诱导物平板培养——加底物——分解（有颜色变化）——检出。 如:邻-硝基苯酚半乳糖苷(ONPG)可被β-半乳糖苷酶水解为半乳糖和黄色的邻-硝基苯酚（ONP） 抗（敏感）性突变株筛选 包括：抗生素、金属离子、温度、噬菌体 ①抗生素抗性突变：提高产量； ②抗噬菌体突变：消除噬菌体污染； ③条件抗性突变：如温度，可提高产量； 　　（温度敏感突变，高温呈营养缺陷表型） 抗（敏感）性突变株筛选 ④敏感突变：　　 如：柠檬酸----------异柠檬酸 氟乙酸抑制顺乌头酸酶 氟乙酸敏感突变型 顺乌头酸酶活性极低，更敏感，