用新的离体肺灌注模型探讨不同浓度的维生素C对大鼠肺缺血再灌注损伤的影响.docxVIP

?堡～士—————————————————————————————————————————————————————————————学位论文仪器利料试剂一 材料、仪器、试荆 一、实验动物：sprague—Dawley雄性大鼠计48只，体重250～3009，由北京军事 医学科学院实验动物中心提供。 二、实验仪器及器材 小动物呼吸机：北京军事医学科学院实验仪器厂 双头恒流泵：上海沪西分析仪器厂 微栓过滤器(40um)：北京医疗器械有限公司 Hx—1055恒温循环器：军事医学科学院实验仪器厂 14G气管插管、14G静脉导管、16G动静脉插管：自制 M60()l多导生理监测仪：日本Nihon Kohden 自动血气分析仪：瑞士cOMPACT I型 TD一20／20]l】mjfnoIlleter分光光度计 721型可见光一紫外分光光度计：上海精密仪器仪表有限公司 三、体外灌注装罱：如图1所示。该装置保温系统包括动力系统、过滤系统、保温 系统。动力由双头恒流泵提供，可保证两个方向的流量一致。40um的血液过滤器在 灌注离体肺之前可将静脉血中的栓子、大颗粒阻挡，防止对离体肺造成栓塞。恒温 循环器和双层玻璃器组成保温系统，恒温循环器运转时，双层玻璃器壁内的水被加 温，从而加热玻璃器中的水，由于储血槽浸在玻璃器中的水中，所以储血槽中的储 存血可控制在指定温度。另外，烤灯可以对受体鼠起保温作用。整个体外灌注系统 运转时，静脉JIIL自受体鼠的髂外静脉以一定速度被泵出，经过滤后对离体肺实施灌 注，收集于储血槽并被加温，在以同样的速度泵入受体鼠的颈外静脉。 第5页 顶十学位论文 图1：体外灌注装置 p9、实验试剂 l、测定肺组织丙j二醛含量所需试剂 1)TBA试剂(0．8％TBA水溶液)：准确称取0．89TBA(分析纯北京化学试剂厂)加 蒸馏水配成100ml溶液，于50“c水浴，静置，取上清液。 2)标准储存液(10um()l／ml四乙氧基丙烷的甲醇溶液)：准确称取】、1、3、。、～四乙氧基丙烷(分析纯北京化学试剂厂)110mg，以甲醇(分析纯北京化学试剂厂)定容至50fnl，于4¨c冰箱存放。 3)标准应用液(10nm01／m1)：称取储备液O．1m1，以甲醇稀释成100ml。 4)甲醇正丁醇混合液(15：85V／V)：正丁醇(分析纯北京化学试剂厂) 5)8．1％sDs溶液：准确称取SDs(分析纯北京化学试剂厂)8，19，以蒸馏水定容 至．100m1。 6)20％醋酸缓冲液(pH3．5)：准确量取冰醋酸(分析纯北京化学试剂厂)20ml，加 蒸馏水稀释至lOOmlo 2、测定肺组织Al、P含量所需试剂 第6砸 型生：!燮兰 堡璺型型堕型—— ATP检测试剂盒(江苏碧云天生物技术研究所)：含裂解液、测定液、ATP标准试剂 (1nmo]／ui) 3、．Euro—c011ins液121】制备 1)Eu胁collins液配方：如表1所示。各成分浓度为：N。+10mmo]／L，K+115 mmol／L， Cr 15 mm。l／L，HC03—10 IIlm。1／L，H2P04—15㈣01／L，HP042—42．5 mmo]几1，Glucose 359／L 表1：Bur。一coll ins液的组成及部分理化性质 2)Euro-c01lins液的制备方法：配制1000m]的Euro—collins液的方法如下 ·称取、混匀：向1500ml的洁净烧杯注入900ml蒸馏水，按表1所示质量准确称 取，依次放入烧杯，顺序为：G1ucose、Kcl、KH2PO。、K：HP04、NaHCO_l；充分混匀．后转移至1500ml的量筒，加蒸馏水至1000ml。 ·过滤、储存：将混匀后的液体经o 25um的微膜过滤器过滤后转移至已高温高压消毒的洁净储液瓶，于4℃下保存。 3)含维生素C的Emo．collins液的制备方法：临用前根据每组保存液要求取一定量 的医用维生素c注射液注入已配制好的Eu1Io—collins液中，混匀即可，4℃下保存。 第7页 硕士学位论文 实验方法 试验方法 sI)_雄性大鼠计64只，体重250～3009，随机配对成32对，分为以下4组 A组：对照组，使用单纯EurO—collins液灌注和保存 B组：Euro collins液+维生素c 100mg几，用于灌注和保存 c组：Eur。飞01lins液+维生素c 200mg／乙，用于灌注和保存 D组：Euro—c。llills液+维生素C 400mg／L，用于灌注和保存 二、供体手术 供体大鼠用3％异戊巴比妥钠麻醉，80mg／kg，腹腔注射。全麻成功后取仰每对sD大鼠中任取一只作为供体提供肺。卧位，行气管切开，使用14G气管插管，连接小动物呼吸机行机械通气，潮气量3m]，60次／分。行胸部前正中切口，开胸。