第2章酶学基础.pptVIP

催量单位： Kat单位：在标准条件下，每秒钟催化1摩尔（mol）底物转化为产物所需的酶量为1Kat 1Kat=1mol/s。 Kat与IU的换算关系如下： 1Kat=60×106IU 三、酶的比活力（specific activity） 每毫克酶蛋白（酶制剂）所含的酶活力单位数称为酶的比活力，用 U／mg 表示。 酶的比活力是酶制剂的一个纯度指标。对同一种酶来说，比活力越高，表明酶纯度越高。 比活力＝ 活力单位 酶蛋白量 四、酶活力测定的方法 总要求：快速、简便、准确 总线 在一定条件下，酶与其作用底物反应一段时间 测定底物减少量或产物变化量 1、游离酶活力测定方法 配底物溶液 确定反应最适条件 混合底物与酶，计时 测底物减少量或产物增加量 酶促反应的速度曲线及其说明 　引起酶促反应速度增加或下降的原因很多，例如：底物浓度下降、产物对酶的抑制、由于产物浓度增加而加速了逆反应、酶变性等。因此，为了排除上述干扰，酶活力应该用酶促反应的初速度来表示。 反应初速度 底物开始反应之后，很短一段时间内的反应速度。反应时间一般采用5-10min。 只要测定方法足够灵敏准确，原则上，反应时间越短越好。 反应结束后，要立刻测出结果。如果不能测出，要及时终止酶反应后再测定。终止反应的方法： 沸水浴加热，使酶失活。 加入变性剂，使酶失活。 加入酸或碱溶液，使pH远离最适pH，终止反应。 将反应液置于冰粒或盐冰中终止反应。 2、固定化酶的活力测定 固定化酶：与水不溶性载体结合，在一定的空间范围内起催化作用的酶 测定方法 振荡测定 柱法测定 3、相对酶活力：具有相同酶蛋白量的固定化酶活力与游离酶活力的比值称为相对酶活力。 相对酶活务的高低表明了固定化酶应用价值的大小。 外源物质——主要有各种无机离子，小分子有机物和蛋白等。 eg：Ag+ Hg2+ Pb2+等重金属离子均有抑制作用。 注意三个概念的区分 酶的抑制作用（inhibition）：酶的必需基团的性质受到某种化学物质的影响而 发生阻断或改变，导致酶活力的降低，这时酶蛋白一般并未变性。 酶的失活（inactivation）：酶蛋白变性引起的酶活力的降低或消失。 酶的去激活作用（deactivatoin）：因激活剂的除去而引起酶活力的降低。 抑制作用的分类 不可逆抑制：抑制剂与酶共价结合后，抑制剂难以除去，酶活不恢复 可逆抑制：抑制剂与酶非共价结合，将抑制剂除去后酶活可恢复 可逆性抑制 竞争性（competitive）抑制 反竞争性（uncompetitive）抑制 非竞争性（noncompetitive）抑制 1、竞争性抑制作用 定义：抑制剂和底物竞争与酶分子结合而引起的抑制作用 竞争性抑制的机制 抑制剂的化学结构与底物相似，能结合酶活性中心的底物结合位点。 在相同的抑制剂浓度下，对酶的抑制程度将随[S]的增加而降低。 抢凳子 双倒数作图 抑制剂浓度增加或使用不同的抑制剂时，酶对底物的最大反应速度不变，酶与底物的结合力下降 Vmax Km 2、非竞争性抑制作用 定义：抑制剂与底物分别与酶分子上的不同位点结合，而引起酶活性降低的抑制作用。 非竞争性抑制的机制 抑制剂与酶活性中心以外的位点结合，两者分子结构与酶结合位点毫不相关，增加底物浓度也不能使抑制作用逆转。底物与抑制剂同酶的结合既不促进，也不排斥。 如别嘌呤醇竞争性抑制黄嘌呤氧化酶，其氧化产物别黄嘌呤非竞争性抑制黄嘌呤氧化酶。 非竞争性抑制剂对酶促反应的抑制程度决定于[I]和Ki，与酶的Km和 [S]无关。 Km不变，Vmax降低 3、反竞争性抑制作用 定义：在底物与酶分子结合生成中间复合物后，抑制剂再与中间复合物结合而引起的抑制作用。 反竞争性抑制的机制 抑制剂不能与未结合底物的酶分子结合，当底物与酶分子结合后，复合物分子结构发生变化，使抑制剂的结合部位展现出来，抑制剂才能结合发生抑制作用。 反竞争性抑制剂的抑制程度与[I]，[S]，Km, Ki有关： 抑制程度随[S]的增加而增加。 抑制剂浓度增加或使用不同的抑制剂时，酶对底物的最大反应速度下降，酶与底物的结合力增加。 Vmax Km 总结 竞争性抑制 非竞争性抑制 反竞争性抑制 最大反应速度（Vm） 不变 减小 减小 Km 增大 不变 减小 第四节 酶的分类与命名 （1）根据作用底物来命名，如淀粉酶、蛋白酶等。 （2）根据所催化的反应的类型命名，如脱氢酶、转移酶等。 （3）两个原则结合起来命名，如丙酮酸脱羧酶等。 （4）根据酶的来源或其它特点来命名，如胃蛋白酶、胰蛋白酶等。 一、习惯命名方法 推荐命名 在惯用名的基础上加以选择和修改而成。有两部分组