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藏红花愈伤组织诱导 及固液两步法合成藏红花素 唐芸芸 生物技术 2007.6.13 一、论文的选题背景 二、论文的研究方法 三、论文后的收获 四、创新和不足之处 论文选题背景 藏红花的生长发育期长。 藏红花生长的环境条件要求苛刻。 藏红花只开花不结果，繁殖困难。 藏红花产量低。 论文选题背景 藏红花资源现状 藏红花资源紧缺，在我国,藏红花只有少量分布,主要集中在西藏、浙江、江苏、上海等地，其于地方属于藏红花限制性气候因素。 藏红花研究现状 研究学者对藏红花的组织培养和利用藏红花愈伤组织生产次生物质研究较少。 论文的研究方法 试验材料及方法步骤 球茎提前出芽的结果 MS培养基对不同外植体愈伤组织诱导率的影响 不同培养基的对同种外植体愈伤组织诱导率的影响 不同的激素配比对同种外植体愈伤组织诱导率的影响。 浅述了固液两步法合成藏红花素方面的问题 材料与方法 试验材料： 外植体:叶片包括幼叶(初冬刚出苗时叶片)和老叶(初春叶片)；芽包括幼芽(球茎上的芽)和嫩芽(球茎幼芽生长约lcm左右时的芽)；球茎。 材料与方法 试验方法： 消毒灭菌：将不同的外植体于自来水中冲洗干净，放入75%酒精中摇动30s，再以0.1% HgC12溶液中消毒8min，无菌水冲洗四次，彻底洗去残余HgC12，滤纸吸干。 接种：在超净工作台上将消毒后的外植体切片(块)：叶片分叶尖、叶中部和叶基部，切约0.5cm2左右；芽分为幼芽和嫩芽，分别切成小片；球茎切成小块，分别接种。 材料与方法 试验方法： 培养条件:诱导培养基的种类为MS,B5,White，激素浓度范围2，4-D0.1-5mg/L，BAP0.1-3.0 mg/L。 球茎提前出芽方法:将5～6月处于休眠时期的藏红花球茎,放置于人工气候箱中,光照强度2560lx ；每天光照时间为10h ；温度(20 ±0.3)℃； 湿度为80%。每天黑暗时间为14 h ；温度(18±0.3)℃；湿度为80%。在此条件下培养1个月。 结果与分析 球茎提前出芽的结果:藏红花球茎的生长条件需要适宜的温度、湿度、光照强度。采用人工气候箱培养,上述各种指标均可人工进行调节，而且比较稳定，可以加湿并能够自动调节湿度,满足藏红花的生长需要的各种环境。试验结果表明在人工气候箱中培养藏红花比在一般培养箱中提前1个月发芽。 结果与分析 MS培养基对不同外植体愈伤组织诱导率的影响:由表1可见,叶片、芽和球茎均可诱导产生愈伤组织，诱导率最高达99%。不同生长时期叶片的诱导率差异明显，初冬刚出幼叶，诱导率较高，叶片老化后，诱导率明显下降，同一叶片的不同的部位(近叶尖、叶中部和叶基部)，诱导率差异不明显。幼芽、嫩芽的诱导率均高达97%，球茎的诱导率77.1%。 结果与分析 不同培养基种类对愈伤组织诱导率的影响:由表2可见，三种不同培养基添加一定的激素均可诱导幼叶产生愈伤组织，并且诱导率高达98%以上。培养基对藏红花愈伤组织的诱导率和愈伤组织的形态都有一定的影响。MS培养基中，愈伤组织出现的时间最早,诱导率最高,诱导的愈伤组织为大的块状,黄色或白色,生长快,又不容易褐化。White和B5培养基具有诱导率较低、部分容易褐化等缺点。 结果与分析 不同激素配比对愈伤组织诱导率的影响：由表3可见，不同的激素配比均可诱导幼叶产生愈伤组织，并且诱导率均在80%以上，其中当2,4-D2.0mg/ L,BAP0.1-0.5mg/ L时，诱导率均在95%以上，可以大量形成幼叶愈伤组织，激素配比以2,4-D2.0mg/ L,BAP0.1-0.5mg/ L为宜。 结果与分析 结果与分析 结果与分析 讨 论 实验解决的问题：本文在藏红花的愈伤组织诱导方面，以叶片、芽、球茎作为不同外植体，分别获得了较高的诱导率。实现了不同外植体的定向培养，即在一定的条件下，使外植体向愈伤组织方向分化；在培养阶段，使用不同的培养基，根据愈伤组织的形成情况，找到了可使愈伤组织大量诱导的可行性方案；找到了合适的激素配比，我们可以通过人工改变激素的配比来控制愈伤组织的诱导率。 实验得出的结论：为了获得较多的愈伤组织，选用MS培养基，以幼叶作为外植体，添加激素浓度2，4-D2.0 mg/L ，BAP 0.1-0.5mg/ L较为合适。 固液两步法合成藏红花素 藏红花的成分及其抗癌作用 藏红花的有效成分:在藏红花的花蕊中含有的藏红花素(Crocin)、藏红花酸（Crocitin）、藏红花醛(safra