基因工程的基本程序丁.pptVIP

基因工程的剪切、拼接、导入、表达的具体过程是怎么样的呢？ 目的基因的来源？ 通过2n形式扩增获取大量的目的基因 DNA复制（体外） 碱基互补配对原则 4种脱氧核苷酸 PCR仪 Taq酶（耐热的DNA聚合酶）、引物等 启动子与起始密码子？终止子与终止密码子？ 启动子和终止子：DNA上 启动子：驱动转录 终止子：终止转录 起始密码子和终止密码子：mRNA上 起始密码子：驱动翻译 终止密码子：终止翻译 2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： 3、将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 ②方法： 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 思考与探究： 利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联系前面有关细胞器功能的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？ 有些蛋白质肽链上有共价结合的糖链，这些糖链是在内质网和高尔基复合体上加工完成的，内质网和高尔基复合体存在于真核细胞中，大肠杆菌不存在这两种细胞器，因此，在大肠杆菌中生产这种糖蛋白是不可能的。 深度思考： 如何筛选出被重组质粒侵入的受体细胞。 青霉素培养基 青霉素抗性基因 思考： 1、受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗？ 2、目的基因是否稳定的存在于转基因生物并按人们的预期进行表达，需要在那些水平上进行检测？ 四：目的基因的检测与表达 分子水平 检测 ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交技术 分子杂交技术 抗原-抗体杂交技术 1、提取受体生物DNA，并解旋成单链； 2、用标记了放射性同位素的目的DNA片段单链作为探针； 3、检测两者是否进行杂交； A- A- 32P T- T- C- G- T- -G 32P -T -T -A -A -C -A X1 C- C- A- G- T- T- A- X2 -G -G -T -C -A -A -T Y1 A- A- T- T- C- G- T- Y1 -T -T -A -A -G -C -A 探针 待测DNAX 待测DNAY 待测DNAY与探针DNA相同 分子水平 检测 个体 水平鉴定 ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 mRNA-DNA 分子杂交 抗原-抗体杂交 若不能表达，要对抗虫基因再进行修饰。 　　例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 β-珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分。当它的成分异常时，动物有可能患某种疾病，如镰刀形细胞贫血症。假如让你用基因工程的方法，使大肠杆菌生产出鼠的β-珠蛋白，想一想，应如何进行设计？ 尝试设计 1）获取小鼠β-珠蛋白基因的编码序列（cDNA）。 2）将cDNA、在大肠杆菌中可以适用的启动子、终止子、抗四环素的基因、质粒等，构建成一个表达载体。 3）将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果表达载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉；如果培养基上长出大肠杆菌菌落，则表明β-珠蛋白基因已进入其中。 4）培养进入了β-珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌体，破碎后检测β-珠蛋白含量，若符合要求，则可用于生产。 * 基因工程的概念 基本过程 结果 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 获得符合人们需要的新产品 对基因进行操作的“手术刀”、 “缝合针”、 “运输工具” 分别是什么物质？有何作用？ 基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 剪切： 拼接： 导入： 表达： 一、目的基因的获取 目