攻毒第10周实验进.pptVIP

攻毒第10周实验进展汇报 实验1 《禽白血病病毒斑点杂交方法的建立与初步应用》的修改。 该文已被中国预防兽医学报接收。 实验2 禽白血病A亚群（RAV-1)病毒攻毒实验第7-10周抗凝血淋巴细胞的分离和淋巴细胞RNA的提取。 淋巴细胞RNA的反转录。 1-10周淋巴细胞RNA和CDNA样品-80度保存。 1-10周血清样品和红细胞的-80度保存。 实验3：死亡鸡(0918）的RT-PCR检测 0918（G88鸡群）鸡于攻毒后第55天死亡，该鸡出现羽毛粗乱，精神萎靡，发育不良，腹部增大，腹部羽毛沾污等临床症状。 剖检发现肝脏轻微肿大，脾脏萎缩，肌胃和腺胃严重肿大，胃黏膜脱落，肌胃和腺胃交接处乳头消失，胃壁变薄，十二指肠出血等病变。 取病死鸡的心、肝、脾、肾、法氏囊和胸腺，常规处理后提取基因组DNA和总RNA。 PCR检测结果 1：心基因组；2:肝基因组；3：脾基因组；4：肾基因组；5：胸腺基因组；6：法氏囊基因组；7：心CDNA；8：肝CDNA；9：脾CDNA；10：肾CDNA；11:胸腺CDNA；12：法氏囊CDNA 0961死亡鸡的PCR检测 编号为0961（G5鸡群）的鸡于攻毒后第65天死亡，该鸡出现厌食、消瘦、虚弱、鸡冠发皱、贫血等临床症状。 剖检病变为肝脏严重充血并肿大，腺胃肿大，胃壁变薄，十二指肠和胰腺有散在出血点。 取该鸡的心、肝、脾、肾、胸腺、法氏囊提取基因组和总RNA，并进行PCR检测。 0961鸡PCR检测结果 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 阳 水 0919死亡鸡的PCR检测 编号为0919鸡（G88鸡群）与攻毒后第69天死亡，该鸡出现发育不良、精神沉郁、呕吐、羽毛竖立、贫血等临床症状。 剖检病变为肝脏严重充血，肝表面出现血管瘤，心胞出血，脾脏轻微肿大，肾脏肿大并出血，肺脏和胰腺均出现严重的充血现象。 取该鸡的心、肝、脾、肾、胸腺、法氏囊提取基因组和总RNA，并进行PCR检测。 0919死亡鸡PCR检测结果 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 阳 水 0968死亡鸡的PCR检测结果 编号为0968(G5鸡群)的鸡攻毒后第72天死亡，该鸡出现身体消瘦，精神沉郁，呕吐，羽毛粗乱，鸡冠泛白等临床症状。 剖检病变为肝脏严重充血，肝小叶尖端出现深黄色区域，十二指肠严重充血并发黑，肾脏肿大。 取该鸡的心、肝、脾、肾、胸腺、法氏囊提取基因组和总RNA，并进行PCR检测。 0968死亡鸡PCR检测 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 阳 水 死亡鸡各组织中RAV-1的PCR统计表 小结 从上述PCR统计表可以看出，试验在RAV-1攻击后的第18天即可检测出病毒，直到攻毒后第72天。在对组织中病毒的检测发现，肝脏是病毒检出率最高的器官，其次是心脏和法氏囊，然后是肾脏，而在脾脏和胸腺中的检出率很低。 实验5：RAV-1攻毒实验第1-9周各鸡群体重的统计学分析 实验6: RAV-1攻毒实验第1-9周各鸡群抗体的消长变化 二重荧光定量PCR反应条件的优化及该检测方法的建立 小结 经过对退火温度及各反应组分浓度的优化，最后确定二重荧光定量PCR的反应条件和反应体系如下： 最佳反应条件：预变性95℃ 3min，变性95℃ 15s，退火61.3℃ 50s。40个PCR循环。 最佳反应体系：反应体系为25ul，其中 10×Ex Buffer 2.5ul，dNTP（2.5nmol/ul）2μL、Hs Ex Taq酶0.5μL、上下游引物（10pmol/ul)各1μL、探针（10pmol/ul)各1μL,重组质粒模板各1μL，双蒸水加至25μL . RAV-1攻毒后第1-4周淋巴细胞CDNA样品的荧光定量PCR检测 RAV-1攻毒后第1-10周各鸡群死亡率的统计表 * * 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 阳 水 1：心基因组；2:肝基因组；3：脾基因组；4：肾基因组；5：胸腺基因组；6：法氏囊基因组；7：心CDNA；8：肝CDNA；9：脾CDNA；10：肾CD