生物化学讲义复制.ppt

第十章 基因信息的传递 第一节 DNA的生物合成 （一）DNA复制的特征 半保留复制 （semi-conservative replication） 半不连续复制 （semi-discontinuous replication） 双向复制 （bidirectional replication） 有特定的起点 一、半保留复制 （一）半保留复制的定义 复制时，母链的双链DNA解开成两股单链，各自作为模板指导子代合成新的互补链。子代细胞的DNA双链，其中一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全重新合成。由于碱基互补，两个子细胞的DNA双链，都和亲代母链DNA碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。 （三）半保留复制的意义 使亲代DNA所含的信息以极高的准确度传递给子代DNA分子。 二、复制的半不连续性 DNA双螺旋的两条链是反平行的，而DNA合成的方向只能是5’→3’ 。 在DNA复制时，1条链的合成方向和复制叉的前进方向相同，可以连续复制，叫作前导链（leading strand）；而另一条链的合成方向和复制叉的前进方向正好相反，不能连续复制，只能分成几个片段（冈崎片段）合成，称之为滞后链（lagging strand）。 领头链连续复制而随从链不连续复制，就是复制的半不连续复制。 三、双向复制 双向复制的定义 复制时，DNA从起始点（origin）向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。 四、有特定的起始点 原核生物只有一个复制起始点 真核生物有多个复制起始点 （二） 参与DNA复制的物质 1．底物：四种 dNTP：dATP 、dTTP、 dGTP、 dCTP 2．聚合酶：依赖DNA的DNA聚合酶，DNA- pol； 3．模板：指解开成单链的DNA母链； 4．引物：提供3’－OH末端，使dNP可以依 次聚合； 5．其他酶和蛋白质因子。 参与复制的主要酶类 （一）DNA聚合酶 （二）解链解旋酶 （三）引物酶 （四）DNA连接酶 DNA聚合酶 全称：依赖DNA的DNA聚合酶（DDDP） 缩写：DNA－pol 活性： 1. 5??3? 的聚合活性 2. 核酸外切酶活性 复制的化学反应 在聚合酶的作用下，一个核苷酸 5′-P和相邻的核苷酸上核糖的3 ′-OH生成磷酸二酯键而逐一聚合的形成多核苷酸链。 （dNMP）n＋dNTP→（dNMP）n+l ＋ ppi 1．原核生物的DNA聚合酶 DNA-pol I DNA-pol II DNA-pol Ⅲ （1）DNA聚合酶Ⅰ： ①结构特点 单一多肽链，从N端到C端有3个酶促活性结构域依次排列：5′→3′外切酶、3′→5′外切酶和DNA聚合酶。 DNA Pol I在蛋白酶的作用下，可分为大、小两个片段。小片段具有5＇→3＇外切酶活性。大片段（又称为Klenow片段）具有聚合酶活性及3′→5 ′外切酶活性，它对核酸技术十分有用。 ②DNA-pol I在活细胞内的功能 1）5′→3′聚合酶的活性：对复制和修复中出现的空隙进行填补。 2）3′→5′外切酶活性：对复制中错误进行即时校读，保证复制的准确性。 3）5′→3′外切酶活性：可去除RNA引物和突变碱基。 （2）DNA-pol II 5′→3’聚合酶活性 3’→5′外切酶活性 无5’→3’外切酶活性 它只是在无pol I及pol Ⅲ的情况下才起作用，其真正的功能也未完全清楚，可能在损伤修复中有特殊作用。 （3）DNA pol-Ⅲ ①结构特点 由10种亚基组成不对称异源二聚体。 核心酶（αεθ） α 亚基：5′→3 ′聚合酶活性 ε亚基： 3 ′ →5′外切酶活性和碱基选择功能 θ亚基:可能起组装作用 β亚基：夹稳模板链并使酶沿模板链滑动 γ－复合物：促进全酶组装至模板及增强核心 酶活性 ② DNA-pol Ⅲ 在活细胞内的功能 5′→3′聚合酶的活性： 是在复制延长中真正催化新链核苷酸聚合的酶。 3′→5′外切酶活性：对复制中错误进行即时校读，保证复制的准确性。 2．真核生物的DNA