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转基因动物制备的方法的;;;;;; 1 转基因动物的概念; 转基因动物自产生以来 ,随着研究的不断深入 ,近些年来得到了迅速的发展。由于它打破了自然繁殖中的种间隔离 ,使基因能在种系关系很远的机体间流动 ,实现了动物种间遗传物质的交换与重组 ,这不仅为遗传物质的研究提供了新的手段 ,丰富了物种的基因库 ,而且扩大了生命科学的视野。
; 转基因动物是动物基因工程在医学生物学研究中的突出成果。
近十年来,为分子遗传学、发育生物学、医学遗传学、肿瘤研究及优良经济动物的开发研究等多方面做出了很大的贡献。
; Gordon 等人首次成功地将含有HSV 和SV40DNA 片段的重组质粒DNA 以显微注射法导入小鼠受精卵的雄原核内,得到了带有这种外源DNA 顺序的TGM 。
1982 年Palmiter 等运用此法得到的所谓“超级巨鼠”,曾引起整个生物学界的轰动。
; 到目前为止,人类已获得转基因鱼、鼠、羊、猪、兔、牛等大小动物。
从转基因动物所获得的资料几乎涉及医学遗传学、肿瘤学、免疫学等的基因研 究,还涉及生物药物的研究,基因治疗的开发研究等。
;2 转基因动物的制备方法;2. 1 显微注射法;;; 以使用较多的小鼠为例,这一方法的实验程序如下:;;优点:
外源DNA大小基本不受限制(1-50kb)
导入过程直观
整合率高; ;2. 2 精子载体介导法;体外受精法 & 胞质内显微注射法;2. 3 胚胎干细胞介导法; 通过一定的方法将外源基因导入到 ES ,外源基因通过随机插入或者同源重组的方式整合到 ES 基因组中 ,再以显微注射法把这种转基因胚胎干细胞植入正常发育的囊胚中 ,然后将囊胚移植到受体动物的子宫内 ,由于胚胎干细胞参与了胚胎生殖系的发育 ,所以所产生的嵌合体其生殖细胞中一部分细胞含有目的基因 ,将嵌合体连续与正常动物进行交配 ,就会得到转基因动物。
;;;ES细胞技术发展历史;1984年,Bradley证实注射入囊胚的小鼠ES细胞可分化为成体的各种组织,并整合入生殖系。
意义:里程碑,与同源重组技术的结合使得在整体水平定向改变和修饰哺乳动物的遗传特性成为可能。
1995年,Thomson从恒河猴中分离了猴的ES细胞;
1998年,Thomson从人的囊胚中分离成功人的ES细胞;
2000年,Bongso等建立了人的ES细胞株
……; ; ;2. 4 逆转录病毒感染法; ; ; 缺点:
容纳大小有限;
重组逆转录病毒的长末端容易甲基化,影响
外源基因的表达。;2. 5 体细胞核移植转基因法;核移植技术;1981年,Illmenser和Hoppe将小鼠胚胎内细胞团的细胞核植入去核的受精卵中,克隆出3只小鼠;
1986年,Willadsen等用未分化的胚胎细胞克隆出一只核移植绵羊;
1987年,Robl用胚胎细胞克隆出核移植羊;
1997年,Wilmut用成年绵羊的乳腺上皮细胞为核供体,克隆出绵羊Dolly。; ; ;2. 6 人工酵母染色体( YAC)法; ; ; 除上述几种常用的转基因方法外,人们为了适应于一些特殊需要也探索了一些其他的方法。例如诱变技术(P265)等,这些方法都不太成熟,其应用也正被人们验证。
;参考文献;参考文献;
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