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(一).分泌蛋白的靶向输送 真核细胞分泌蛋白前体合成后靶向输送过程： 细胞质核糖体→粗面内质网→形成输送小泡→高尔基体→形成分泌小泡→泡吐到细胞外部． 1.信号肽(signal peptide) 各种新生分泌蛋白的N端保守 的氨基酸序列称信号肽。 多数信号肽位于肽链N端，也有位于位于中部的。 靶向输送蛋白 信号序列或成分 分泌蛋白 信号肽 内质网腔蛋白 信号肽，C端-Lys-Asp-Glu-Leu-COO-(KDEL序列) 线粒体蛋白 N端靶向序列（20～35氨基酸残基） 核蛋白 核定位序列（-Pro-Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Val-，SV40 T抗原） 过氧化体蛋白 -Ser-Lys-Leu-（PST序列） 溶酶体蛋白 Man-6-P（甘露糖-6-磷酸） 靶向输送蛋白的信号序列或成分 导肽 导肽 10-15 α-螺旋 2.分泌性蛋白信号肽的作用( function of signal peptide) 将肽链引向并跨过内质网膜.这个过 程需要信号肽识别颗粒 (signal recongnition particle SPR)及受体 协助. 信号肽引导真核分泌蛋白进入内质网 目 录 蛋白转运因子 hsp70 信号肽引导真核分泌蛋白进入内质网 信号肽靶向引导肽链进入线粒体 (二).导肽理论 线粒体,叶绿体等细胞器的膜蛋白是 由导肽牵引和定位的.是肽链先合成后再分选 和运输的. (1).碱性氨基酸含量丰富,分散于不带 电荷的氨基酸中. (2).缺失带有负电的酸性氨基酸残基. (3).有形成两性α-螺旋的能力 1.导肽特征: 目 录 导肽 Hsp60替换Hsp70 (三)细胞核蛋白的靶向输送 目 录 肽链转位，输入因子解聚 4-8氨基酸 GTPase 1.核定位序列不一定位于N端. 2.蛋白质定位后核定位序列不被切除. 3.需要核输入因子协助，它是核定位信号的 受体，具有GTPase酶活性（又称Ran蛋白） 细胞核蛋白的靶向输送特点： 功能蛋白质的研究进展 一．蛋白质工程的概念和技术路线 蛋白质工程： 1981年,美国基因公司Ulmer提出,是指通过对蛋白质化学,蛋白质晶体学和动力学的研究获取关于蛋白质理化等各方面的信息,在此基础上对编码该蛋白的基因进行有目的设计改造,并通过基因工程等手段将其进行表达和分离纯化,最终将投入使用. 蛋白质工程基本步骤 分离纯化目的蛋白 对目的蛋白进行氨基酸测序,晶体衍射,核磁共振进行分析,获得结构和功能的数据. 设计寡核苷酸引物 将改造的基因片段插入适当的表达载体,并加以表达 从基因文库中筛选的获得编码该蛋白基因序列 设计改造方案并对基因序列进行改造 对表达产物 进行功能测定 分离纯化表达产物 （一）蛋白质工程研究的一般规律 (二)蛋白质工程和基因突变 对蛋白质的改造水平: 蛋白质水平 基因水平 指对生产出的蛋白质进行加工和修饰,如磷酸化,糖基化等. 缺点:反应条件剧烈 专一性不强. 操作量大. 蛋白质水平改造: 根据目的对编码蛋白质的基因进行改造, 小大改变一个核酸大到改变某一结构域的编 码序列.常使用基因诱变技术. 基因水平的改造: 定点诱变 专一改变基因中某个或某些特定氨基酸的技术，产生工业或医药所需的蛋白质． 二．蛋白质的功能域及模拟肽 (一)功能蛋白质的结构特点: 1.结构域:.分子量大的蛋白质三级结构常 可被分成一个或一个以上的球 状或纤维状区域,折叠紧密,各 行其功能,称为结构域. 蛋白质分子中的关键氨基酸在一级结构 上相距很远,在空间结构上靠近形成识别结 合中心,也是形成活性功能结构域分子基础. (二)多肽文库建立 在丝状噬菌体表面将模拟某些生物大分子功能的随机短肽一一展示. 人工合成随机肽段(6-9)的编码DNA片段 多肽文库的建立 插入到丝状噬菌体外膜蛋白基因中 随着噬菌体基因表达将其展示一一在表面，使每个噬菌体展示一种多肽．，它们的集合 三．蛋白质组学和药物基因组学 人类基因组计划及后基因组时代 1.人类基因组计划 1990年10月由美国首先提出并启动了人类基因组计划，即计划对人类23对染色体中所包含的约10万个基因中的约30亿个碱基的序列进行检测；从而获得人类自身的最基本的生物学信息。于2001年6月26日全部完成。其中我国完成了第3号染色体中的3千万个碱基序列测定任务。 后基因组时代的任务就是