DNA复制、修复和重组.pptVIP

* * * * * * * （二）鼠伤寒沙门氏菌的鞭毛相变 （三）免疫球蛋白基因的重排 三、转座重组 转座子（transposon） ——可以发生转座的DNA 转座元件本身可导致： 序列的缺失、插入以及将宿主序列转到新位点 同源便携区（portable region of homology） ——为重组提供底物位点 对表型有积极/消极的作用（Selfish DNA） （一）细菌的转座因子 1、插入序列（Insertion Sequence，IS） ——是简单转座模序 只编码起始自己转座的蛋白 转座频率各异 结构特点： 两侧末端为倒转重复序列（inverted repeats） 旁侧为宿主DNA短正向重复序列 2、转座子 ——带有编码转座功能酶的基因 及抗性（或其他标记）基因 组合因子：插入序列标记基因插入序列 两类结构 复合因子： 转座酶基因 反向重复解离酶基因 反向重复 标记基因 组合转座子结构 3、转座过程 转座酶识别 形成中间体 复制型转座（replicative transponsition） 非复制型转座（nonreplicative transponsition） 缺口不被修复后果严重 保守型转座（conservative transposition） 类似于噬菌体的整合 转座子两侧被切开 游离3’OH的作用 或者直接填补空隙 或者进行复制产生共整合体 需要解离酶 * * * * * * * 普遍性转导与局限性转导的区别 区别要点 普遍性转导 局限性转导 转导发生的时期 裂解期 溶原期 转导的遗传物质 供体菌DNA任何部位或质粒 噬菌体及供体菌特定部位DNA 转导的后果 完全转导或 流产转导 受体菌获得供体菌DNA特定部位的遗传特性 转导频率 较低 增加1000倍 （三）重组有关的酶 保守的8碱基非对称序列 大肠杆菌DNA每5-10Kb自然发生一次 被recBCD酶所识别 刺激重组——重组热点 1、chi 位点 2、recBCD酶 解旋酶活性：在SSB存在时解开双螺旋 ATP酶活性 核酸外切酶活性 核酸内切酶活性 ——产生DNA单链 RecBCD从一端靠近Chi位点 在移动中降解DNA 在Chi位点3’ 4-6bp 行使内切酶活性 丢掉RecD 只保留解旋酶活性 3、RecA 有两种不同的活性形式 SOS反应中的蛋白酶活性 促进单链DNA和双链分子中互补链配对 （单链置换双链中的同源链） 单链吸收/单链同化 Single-strand assimilation χ(chi)—sequence 具有物种，基因和genome seq.的特异性 in E.coli genome 1000 chi-seq. chi RecBCD 4-6bp OH RecA-p DNA解旋 再螺旋 只要在入侵单链和双链之间有自由的末端 RecA即可促进单链的同化 分支迁移 4、RuvAB复合物——置换RecA RuvA（四聚体） 识别Holliday连接体的结构 在交换点处与DNA四条链结合 RuvB（六聚体） ATP酶，有解旋酶活性 ——为分支迁移提供动力 核酸内切酶 切开Holliday连接体 识别不对称位点ATTG 5、RuvC 二、特异位点重组 （一）λ噬菌体DNA的整合与切除 1、 λ噬菌体DNA的物理状态 裂解phage： 为独立分子形式 在受侵染细菌中为环状 溶原状态： 是细菌染色体的整合部分 （原噬菌体） 整合 切除 整合在附着位点（attachment sites）上发生 特异位点重组的结果 倒位 切除 特异的重组位点—附着位点 细 菌∽attB，由BOB’组成 噬菌体∽ attP，由POP’组成 O称为核心序列、B、P称为臂 重组酶——λ整合酶（integrase，Int） 非细菌重组所必需 整合宿主因子（integration host factor，IHF） Xis蛋白：改变DNA结构，使其对整合呈惰性 参与切除反应