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一、问答题： 1、试述塔板理论的基本关系式及理论要点。 答：塔板理论的基本关系式为： 在tR一定时，W或W1/2越小(即峰越窄)，理论板数n 越大， 理论板高越小，柱的分离效率越高。因此，理论塔板数是评价柱效能的指标。 1）色谱柱内存在许多塔板，组分在塔板间隔（即塔板高度）内可以很快达到分配平衡。 2）流动相进入色谱柱，不是连续的而是脉动式的，即每次通过为一个塔板体积。 3）样品加在每个塔板上，样品沿色谱柱轴方向的扩散可以忽略。 4）在所有塔板上分配系数相等，与组分的量无关。即分配系数在各塔坂上是常数。 2、利用范氏方程说明HPLC中如何选择实验条件？ ① 采用粒径小而均匀的球形固定相,首选化学键合相,用匀浆法装柱.② 采用低黏度流动相,低流量(1mL/min),首选甲醇.③ 采用柱温箱,避免室温波动,增加实验重复性,柱温以25～30℃为宜. 3、高效液相色谱仪包括哪些主要部件？各部件的作用是什么？ 高效液相色谱仪由五大部分组成：高压输液系统，进样系统、分离系统、检测系统和色谱工作站。 由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统。高压输液系统由储液罐、过滤器、高压输液泵、梯度洗脱装置等组成。流动相在进入高压泵之前，应先进行过滤和脱气处理。高压输液泵是核心部件，其密封性好，输出流量恒定，压力平稳，可调范围宽，便于迅速更换溶剂及耐腐蚀等。 进样系统是将被分离的样品导入色谱柱的装置。要求密封性、重复性好，死体积小，便于实现自动化。进样系统包括取样、进样两个功能。 分离系统主要是指色谱柱，色谱柱是高效液相色谱仪的核心部件，要求分离度要高、柱容量大、分析速度快。 检测器是HPLC仪的三大关键部件之一。用来连续监测经色谱柱分离后的流出物的组成和含量变化的装置。 其作用是把洗脱液中组分的量转变为电信号。并由工作站（或记录仪）绘出谱图来进行定性、定量分析。 色谱工作站是色谱仪的自动化控制包括自动进样系统的进样方式、输液泵系统中的溶剂流速、梯度洗脱程序、检测系统的各项参数、数据记录和处理等。 什么是锐线光源？为什么空心阴极灯发射线是锐线？ 答：锐线光源是能发射出谱线半宽度远小于吸收线半宽度的光源。锐线光源发射线半宽度很小，并且发射线与吸收线中心频率一致。锐线光源需要满足的条件：a.光源的发射线与吸收线的ν0一致。b.发射线的Δν1/2小于吸收线的 Δν1/2。 空心阴极灯是一个封闭的气体放电管。用被测元素纯金属或合金制成圆柱形空心阴极，用钨或钛、锆做成阳极。灯内充Ne或Ar惰性气体，压力为数百帕。发射线波长在370.0nm以下的用石英窗口，370.0nm以上的用光学玻璃窗口。 当灯的正负极加以400V电压时，便开始辉光放电。这时电子离开阴极，在飞向阳极过程中，受到阳极加速，与惰性气体原子碰撞，并使之电离。带正电荷的惰性气体从电场获得动能，向阴极表面撞击，只要能克服金属表面的晶格能，就能将原子由晶格中溅射出来，从而产生阴极物质的共振线。由于灯内压力很低，压力变宽小，因而产生的共振线是锐线光源。 5、紫外-可见分光光度计主要有哪几种类型？各类型有何特点？ 答案一 按光束分： 1单光束分光光度计：结构简单，操作方便，维修容易，适用于常规分析。 2双光束分光光度计：可以自动消除光源强度变化所引起的误差。 3双波长分光光度计：（1）大大提高测量准确度，完全扣除背景。（2）可用于微量组分测定 （3）可用于浑浊液和多组分混合物的定量测定。 4双重单色器分光光度计 5配置光多道二极管阵列检测器的分光光度计 答案二 紫外-可见分光光度计的类型很多，但可归纳为四种类型，即单光束分光光度计、双光束分光光度计、双波长分光光度计和二极管阵列分光光度计。 单光束分光光度计 特点： 使用时来回拉动吸收池→移动误差 对光源要求高 3、比色池配对 双光束分光光度计 特点： 不用拉动吸收池，可以减小移动误差 可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，对光源要求不高 可以自动扫描吸收光谱 双波长分光光度计 特点： 1、利用吸光度差值定量 2、消除干扰和吸收池不匹配引起的误差 优点： （1）大大提高了测定准确度，可完全扣除背景 （2）可用于微量组分的测定 （3）可用于混浊液和多组分混合物的定量 二极管阵列分光光度计 特点 由光源发出，经消色差聚光镜聚焦后的多色光通过样品池，再聚焦于多色仪的入口狭缝上，透过光经全息光栅表面色散并投射到二极管阵列检测器上，二极管阵列的电子系统，可在0.1s的极短时间内获得从190~820nm范围的全光光谱。 若用反相键合相分离弱酸或弱碱时产生拖尾，如何克服？ 答：反相键合相色谱在分离弱酸或弱碱样品的时候会发生拖尾