凝胶色谱样品前处理丁明玉.pdfVIP

凝胶色谱 样品净化技术 丁 明玉 清华大学化学系 dingmy@mail.tsinghua.edu.cn dingmy@mail.tsinghua.edu.cn ddiinnggmmyy@@mmaaiill..ttssiinngghhuuaa..eedduu..ccnn 报告内容 报告内容 报报告告内内容容 1. 凝胶色谱分离原理及应用领域 2. 凝胶色谱样品净化技术 1.凝胶色谱分离原理及应用领域 � 凝胶色谱：以多孔凝胶为固定相，利用凝胶孔的空间 尺寸效应，使不同大小的分子达到分离的HPLC方法。 凝胶的网络结构 溶质分子进入凝胶网络中 凝胶色谱分离机理 � 分离机理：类似于分子 筛效应。大体积分子只能 渗入少量大孔，在固定相 中所经历的路径较短，先 流出。所有孔隙都不能进 入的大体积分子，不被保 留，在死体积流出。 � 洗脱顺序：溶质按分子体积从大到小依次流出。 凝胶色谱法的类型 � 又称：空间排斥色谱、体积排阻色谱。 � 凝胶色谱（gel chromatography）分为： 凝胶渗透色谱（gel permeation chromatography, GPC）： 以有机溶剂为流动相； 凝胶过滤色谱（gel filtration chromatography, GFC）：以 水为流动相。 � 流动相不影响溶质在两相的分配系数K （渗透系数）。 p 凝胶孔径与分配系数Kp K 渗透（分配）系数 为平衡时溶 p K =[X ]/[X ] p s m 质在固定相和流动相中的浓度比。 K =1 K =0 P K =0-1 P P � 排斥极限：不能进入所有凝胶孔的最小分子量 (K =0)。 P � 全渗透点：所有凝胶孔都能进入 的最大分子量(K =1) P � 分子量范围：排斥极限(K =0)与全渗透点(K =1)之间的分子量范围。 P P 在此范围内，分子量越大，K 越小。 P � 固定相选择原则： 前处理应尽可能使大分子不能进入所有孔。 保留体积与渗透系数的关系 � 凝胶色谱的保留值常用保留体积V (淋洗体积)表示。其 e 保留体积与渗透系数的关系： V