中科院-生物化学与分子生物学考博补充一.docxVIP

生物膜的运输机制？ 细胞膜物质转运的方式有单纯扩散，易化扩散，主动转运，出胞与入胞各自特点和机制为：单纯扩散，脂溶性的小分子物质或离子从膜的高浓度侧移向低浓度一侧的现象称为单纯扩散。单纯扩散的特点是，不需膜蛋白质帮助，不消耗细胞自身代谢能量，顺浓度差进行，单纯扩散转运的物质为脂溶性小分子物质易化扩散，指水溶性的小分子物质或离子在膜蛋白质的帮助下从膜的高浓度一侧移向低浓度一侧的转运方式。易化扩散的类型有载体转运。载体转运的特点有特异性，饱和性，竞争性抑制。载体转运转运的物质：主要是水溶性小分子有机物。主动转运，指在细胞膜上生物泵的作用下,通过细胞本身的耗能将物质从膜的低浓度一侧向高浓度的转运。主动转运转运的物质主要是离子物质如钠，钾，钙。特点是需要生物泵作用，消化细胞自身代谢能量，逆浓度差进行。出胞与入胞，大分子物质从细胞内移向细胞外称为出胞。大分子物质从细胞外移向细胞内称为入胞。出胞与入胞转运的物质为大分子物质。出胞与入胞的特点为需要细胞膜的运动，消耗细胞自身代谢能量。 DNA复制原理？ DNA复制基本规律：①复制过程为半保留方式；②原核生物单点起始,真核生物多点起始,复制方向多为双向,也有单向；③复制方式呈多样性, (直线型、Q型、滚动环型…等)；④新链合成需要引物,引物RNA长度—般为几个～10个核苷酸,新链合成方向5’→ 3’,与模板链反向,碱基互补；⑤复制为半不连续的,以解决复制过程中,两条不同极性的链同时延伸问题,即…—条链可按5’→ 3’方向连续合成称为前导链,另一条链先按5’→ 3’方向合成许多不连续的冈崎片段(原核生物一般长1000-2000个核苷酸,真核生物一般长100--200个核苷酸),再通过连接酶连接成完整链, 称后随链,且前导链与后随链合成速度不完全—致,前者快,后者慢. DNA复制主要包括引发、延伸、终止三个阶段. DNA的复制是一个边解旋边复制的过程.复制开始时,DNA分子首先利用细胞提供的能量,在解旋酶的作用下,把两条螺旋的双链解开,这个过程叫解旋.然后,以解开的每一段母链为模板,以周围环境中的四种脱氧核苷酸为原料,按照碱基配对互补配对原则,在DNA聚合酶的作用下,各自合成与母链互补的一段子链.随着解旋过程的进行,新合成的子链也不断地延伸,同时,每条子链与其母链盘绕成双螺旋结构,从而各形成一个新的DNA分子.这样,复制结束后,一个DNA分子,通过细胞分裂分配到两个子细胞中去! 免疫共沉淀与ChiSeq原理。 什么是ChIP? ChIP的原理很简单：选择性富集包含某一特异性抗原的染色体（质）片段。能够识别某一蛋白或目的修饰蛋白的抗体被用来确定抗原在基因组中一处或多处的相对丰度。 1、分离总染色体（质）（需要通过交联使目的抗原固定在染色体（质）与其结合的部位）。 2、将染色体（质）切割成片段（以提高精度）。 3、对切成片段的染色体（质）进行免疫沉淀。 4、免疫沉淀的染色体（质）片段进行分析，确定靶 DNA序列水平与其输入的染色体（质）的相对丰度。 甲醛处理细胞---收集细胞，超声破碎---加入目的蛋白的抗体，与靶蛋白-DNA复合物相互结合---加入ProteinA，结合抗体-靶蛋白-DNA 复合物，并沉淀---对沉淀下来的复合物进行清洗，除去一些非特异性结合---洗脱，得到富集的靶蛋白-DNA复合物---解交联，纯化富集的DNA-片段---PCR分析。 简述真核生物5’帽子结构和功能。 m是甲基，m7G指7-甲基 鸟嘌呤核苷酸m7G是所有mRNA的帽子都有结构，它跟5-PPPN相连（即mRNA5端起始三磷酸核苷酸）。 帽子结构通常有三种：m7GPPPN，m7GPPPNm，m7GPPPNmNm。它们分别被称为O型、I型和II型 mRNA的加工修饰包括：5‘端形成 帽子结构、3’端加polyA、剪接除去内含子和甲基化。①在5’-端加帽 成熟的真核生物mRNA的5’-端有m7GPPPN结构，称为甲基鸟苷帽子。它是在RNA三磷酸酶，mRNA鸟苷酰转移酶，mRNA（鸟嘌呤-7） 甲基转移酶和mRNA（核苷-2’） 甲基转移酶催化形成的。甲基化程度不同可形成3种类型的帽子：CAP 0型、CAP I型和CAP II型。鸟苷以5’-5’焦磷酸键与初级转录本的5’-端相连。 真核生物 帽子结构的复杂程度与 生物进化程度关系密切。5’帽子的功能mRNA 5’-端 帽子结构是mRNA翻译起始的必要结构，对核糖体对mRNA的识别提供了信号，协助核糖体与mRNA结合，使翻译从AUG开始。帽子结构可增加mRNA的稳定性，保护mRNA免遭5’ →3‘ 核酸外切酶的攻击。 在蛋白质合成过程中，它有助于核糖体对mRNA的识别和结合，使翻译得以正确起