马蹄香实验方案.pptVIP

马蹄香的组织培养 实验者：肖正凤 指导老师：曾汉元 马蹄香 　　中草药 　　科中文名：马兜铃科 　　属中文名：马蹄香属 　国内分布：江西、湖北、河南、陕西、甘肃、四川、贵州 　　海 拔：600-1000 　　中国植物志：24:160 　　英文植物志：5:246 　　（Desmodium styracifiolium (Osb.) Merr）潮汕地区别名称为铜钱草、金钱草、落地金钱、山地豆、老虎耳、月姑草、假地豆。外地别名称为广东金钱草、铺钱草、铜钱疳、大金钱草、落地金钱、一面锣、地豆公。本品为豆科山绿豆属金钱草。为多年生亚灌木状草木。生于丘陵坡地、山野、茺地、草丛、路边、沟边。分布于我国大部分省、区。 　　马啼香味微辛、苦、甘、淡，气香，性平，无毒。内服利尿通淋、清热除湿、解暑、消风散气、去积、活血。入肝、肾、小肠、膀胱经。主治急性黄疸型肝炎、血尿、砂淋、尿血、伤风风头痛、胃痛、风嗽、小便不利、风湿水肿、久积酸痛。外治痈肿疔疖等。 实验目的 通过马蹄香的组培，探究适合马蹄香的最适培养基以及最适生长素和细胞分裂素的比值，逐步扩大马蹄香的培养。 实验原理 植物体的所有细胞含有该植物所含的全套遗传信息，通过对该植物细胞的脱分化成为愈伤组织在进行再分化，使细胞逐步发育成为该植物体的各组织以及器官，最终成为整株植物。 实验方法与步骤 1.培养材料的采集 2.培养材料的消毒 3.制备外植体 4.接种和培养 培养材料的采集 由于马蹄香是草本植物，所以采取其茎尖分生组织部分0.1mm左右 培养材料的消毒 （一）先将材料用流水冲洗干净，最后一遍用蒸馏水冲洗，再用无菌纱布或吸水纸将材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小块。 （二）在无菌坏境中将材料放入70％酒精中浸泡30－60秒。 （三）再将材料移入漂白粉的饱和液或0.01％升汞水中消毒10分钟。 （四）取出后用无菌水冲洗三、四次。 制备外植体 将已消毒的材料，用无菌刀、剪刀、镊子等，在无菌的环境下，剥去茎的鳞片，叶片然后切成0.2－0.5厘米厚的小片，这就是外植体。在操作中严禁用手触动材料。 接种和培养 1.接种 在无菌坏境下，将切好的外植体立即接在培养基上，每瓶接种4－10个。 2.封口 接种后，瓶、管用无菌药棉或盖封口，培养皿用无菌胶带封口。 3.温度 将培养基放在25℃ 的环境中 4.增殖 外植体的增殖是组培的关键阶段，在新芽等形成后为了扩大繁殖系数，需要继代培养。 培养基的配置 混合培养基中的各成分 先量取大量元素母液，再依次加入微量元素母液、铁盐母液、有机成分，然后加入植物激素及其他附加成分。溶化琼脂  溶化琼脂 称取应加的琼脂和蔗糖，将琼脂浸泡到透明后，用蒸馏水加热烧开熔化琼脂，待琼脂完全溶化后，把1加入，用pH试纸测pH值，并用0.1mol的NaOH或HCl调pH为5.6-5.8，最后加水定容至所需体积。 分装 将熬好的培养基分装于培养瓶中，分装时注意不要把培养基倒在瓶口上，以防引起污染，然后用封口膜或瓶盖封口。 灭菌 由于培养基内有丰富的营养物质，极利细菌和真菌繁殖，造成污染，影响组培的成功，一般有高温高压 * * *