热应激奶牛瘤胃液中溶纤维丁酸弧菌的含量.pdf

热应激奶牛瘤胃液中溶纤维丁酸弧菌的含量 王建平 （河南科技大学 动物科技学院，河南 洛阳 471003 ） 摘 要：为探讨不同生理状态热应激奶牛溶纤维丁酸弧菌（Butyrivibrio fibrisolven）的 含量差异，选择 48 头产奶母牛，按照因子试验设计分为中期和后期、高产和中产、初产和 经产牛。奶牛经历一周热应激后，采集瘤胃液，利用 RT- PCR 定量分析方法，测定瘤胃液 中溶纤维丁酸弧菌的含量，结果显示，微生物的数量经 lg 转化后，高产奶牛瘤胃液中溶纤 维丁酸弧菌为 9.63，中产奶牛瘤胃液中溶纤维丁酸弧菌为 9.46，差异不显著（P＞0.05）； 初产牛为 9.47，经产牛为 9.62，差异不显著（P＞0.05；中期牛为 9.55，后期牛为 9.54， 差异亦不显著（P＞0.05）。综上所述，在奶牛遭受热应激时，溶纤维丁酸弧菌含量与奶牛 的耐受热应激能力有关。 关键词:奶牛；热应激；溶纤维丁酸弧菌；实时定量 PCR 中图分类号：S823 文献标识码：A 热应激是机体应对环境高温，所产生的非特异性应答反应。荷斯坦成年奶牛的最适环境 温度为 10～15℃，当温度高于22 ℃或温湿指数（THI ）超过72h，处于中等程度热应激，当 温湿指数超过82 时，处于重度热应激（Kadzere C.T. et al. ，2002 ）。热应激奶牛食欲降低， 采食减少，消化和代谢障碍（Wang et al. ，2010 ；Z.L. Liu 2008 ；García-Ispierto et al.，2007 ）。 由于奶牛消化道中栖息着大量的微生物，这些微生物帮助宿主利用植物类物质获得能量 （Krause and Russell ，1996；高巍和孟庆翔， 2003 ），因此研究瘤胃微生物是研究反刍动 物消化的基础。溶纤维丁酸弧菌（Butyrivibrio fibrisolven ）是一种代谢最丰富的瘤胃细菌， 具有淀粉酶降解活性、蛋白降解酶活性和生物氢化作用、可发酵的底物范围广，在瘤胃消化 过程具有重要作用（Maia et al. ，2010 ）。在瘤胃细菌中，溶纤维丁酸弧菌是一个相对稳定， 但又处于持续动态变化中的群落，其组成和分布受日粮组成、季节变化、宿主健康状况和环 境温湿度等多种因素影响（Benchaar et al. ，2007 ；刘开朗等，2009 ）。由于传统研究方法方 法的局限，目前对瘤胃微生物的认识仍很有限（Newbold et al. ，2004 ）。近年来，以细菌核 糖体DNA 序列（16S rDNA）分析为基础的微生物分子生态学的发展突破了微生物纯化培养 的限制，成为研究瘤胃微生物生态的有效方法（赵玉华和王加启，2006 ）。本试验采用real time-PCR 分析技术对热应激奶牛瘤胃液中溶纤维丁酸弧菌（Butyrivibrio fibrisolven ）进行定 量，旨在为探讨奶牛热应激的瘤胃发酵机制提供依据。 1 材料与方法 1.1 试验设计 选择48 头中国荷斯坦奶牛，根据产乳量、分娩时间和胎次进行配对试验设计。分为高 产牛（（40.4 ±4.7 ）kg/d ）和中产牛（（30.5 ±1.7）kg/d ），中期牛（136±17 DIM （产奶 日））和后期牛（205 ±3.4 DIM （产奶日）），初产牛 （头胎）和经产牛（两2 胎及以上）。 1.2 瘤胃液的采集 在试验牛舍内牛群的中间和两端，与牛体等高（距地面约1.5 m）挂温湿度表，每天记 录07:00h、14:00h 和22:00h 温度和及相对湿度。根据 Drackley 等（2003 ）的方法计算环境 湿热指数。当连续 1 周早中晚THI （湿热指数）均大于72 时进行采样瘤胃液的采集。采样 在早晨饲喂后5 h 进行，利用专用口腔采样器放入瘤胃底部采集瘤胃液，弃掉初采集含有较 多粘液的部分，样品分装于10 mL 离心管，液氮（-196℃）中保存。 1.3 瘤胃微生物总 DNA 的提取与纯化 将样品无菌条件溶于PBS （磷酸缓冲液）中（Phosphate buffer solution ，PBS ；137 mmol NaCl ，2.7 mmol KCl ，10mmol Na HPO ，2 mmol K