第五部分体内药物分析资料讲解.pptVIP

第五章 体内药物分析;生物样品特点;样品制备：去除蛋白质、缀合物水解、化学衍生化、分离浓集（液液萃取、固相萃取等）； 样品测定：光谱分析法、色谱分析法、免疫分析法、生物学方法 方法验证：特异性、标准曲线和定量范围、定量下限、精密度与准确度、稳定性、提取回收率;第一节、常用体内样品的制备与贮藏;血清的制备：采集的静脉血液置试管中，于37℃或室温放置30min?1h。血液凝固后，用细竹棒或玻璃棒轻轻剥去试管壁上的血饼，再在2500?3000 r/min离心5?10min，上层淡黄色液体即为血清。 现文献所指血药浓度为血浆或血清中药物总浓度（游离的和血浆蛋白结合的总浓度）。 ;血浆与血清的区别 ;（二）尿样： 尿样测定主要用于药物剂量回收研究、药物肾清除率和生物利用度等研究，以及测定代谢物类型等。体内药物清除主要是通过尿液排出，药物可以原型（母体药物）或代谢物及其缀合物形式排出。尿样常需加入防腐剂。 ; 成人一日排尿量为1?5L。尿样包括随时尿、晨尿、白天尿、夜间尿及时间尿几种。因尿液浓度变化较大，所以应测定一定时间内排入尿中的药物总量。一般采集时间尿（规定时间内采集尿液体积和排入尿中的药物总量）。 尿液中药物浓度的改变不能直接反映血药浓度，即与血药浓度相关性较差、尿液量较大不易保存等。 ;（三）、唾液： 唾液中的药物浓度通常与血浆浓度相关。样品易得，取样无损害，尤易为儿童接收。有些可从药物唾液浓度推定血浆中游离药物浓度。 唾液由腮腺、颌下腺和舌下腺三个主要的唾液腺分泌汇集而成前两者分泌量占总量90%。两者中浓度大致相当。 取样：在潄口后15min，安静状态下采集口腔内然流出的唾液；也可在刺激下快速采样(需注意干扰) 。如口嚼石腊片或将柠檬酸、维生素C等置于舌尖，弃去初始部分后采集。刺激后采集的为混合唾液。 ;药物在脏器组织中的分布情况，常用胃、肝、肾、肺、心等。 制备：测定之前一般需制成匀浆 组织样品的处理：沉淀蛋白法、酸水解法、酶水解法 （蛋白水解酶） ;（五）头发：;头发样品的采集：采集枕部发样(带根部），???量元素在前额部位的头发中含量最低，枕部含量最高。 头发样品的洗涤：除去外源性污染物，推荐使用丙酮-水-丙酮；丙酮浸泡搅拌10min，自来水漂洗3次，再用丙酮浸泡搅拌，自来水、蒸馏水各洗3次。 头发样品的处理：直接甲醇提取、酸水解、碱水解、酶水解（葡萄糖醛酸酶） ;三、体内样品的贮存与处理;分析方法与样品处理步骤的选择;一、体内样品预处理的目的 1、使药物从缀合物及结合物中释放出来，以测定药物的总浓度。 2、介质复杂，干扰物多，待测物浓度低，须分离干扰物质、富集待测药毒物 3、为了适应和符合测定方法所要求的灵敏度 4、为了防止分析仪器的污染、劣化，提高检测准确度、精密度和选择性等。 ;二、常用体内样品预处理方法 要考虑：药物的理化性质（极性、酸碱性、光谱特性、挥发性、稳定性），药物测定的目的，选用的生物体液和组织的类型，待测物的浓度范围，样品制备与分析技术的关系。;（一）、去除蛋白质;2、加入中性盐 使蛋白脱水而沉淀，硫酸铵最常用 3、加入强酸 与蛋白形成沉淀，阴离子型沉淀剂。如三氯醋酸、高氯酸、偏磷酸等，在酸性下分解的药物不宜用本法去蛋白。 4、热凝固法 加热至90℃蛋白热变性后离心或过滤除去; （二）分离、纯化与浓集 当药物浓度较低或分析方法的特异性或灵敏度不够高时，生物样品需分离、纯化与浓集。;1、液相萃取法;*;提取溶剂：极性相似相溶 溶剂的用量：一般有机相与水相之比为1：1~5：1 溶液的pH调节：最佳pH选择主要与药物的pKa值有关。酸性药物pH应低于药物pKa值1~2个单位；碱性药物：pH应高于药物pKa值1~2个单位。 提取：进行一次（至多二次）提取， 浓集：常用吹氮气使溶剂挥散，或减压蒸发（注意暴沸）。 ;生物样品宜在碱性或近中性提取，生物基质中内源性物质多为酸性，在碱性下不易被萃取出来。;液液萃取特点： 优点：可将大部分内源性杂质去除；经济实用、可使样品富集、可一次进行多个样品萃取 缺点：乳化、污染环境、 乳化的去除：加少量固体氯化钠到水相中可减轻乳化；轻微乳化离心；严重乳化低温冰箱快速冷冻破坏乳化层后融化离心。;2、固相萃取法：;*;固相萃取的模式及原理;实验步骤;*; 柱切换高效液相色谱技术是指由阀来改变流动相走向与流动相系统，从而使洗脱液在一特定时间内从预处理柱进入分析柱的技术。 用两个或两个以上柱子连接构成色谱网络系统，使不同柱子达到不同分离目标，柱