酶学分析技术教学案例.pptVIP

酶学分析技术; 酶的活性是指酶的催化能力的大小，即酶促反应速度的快慢。在规定条件下，单位时间内底物减少的量或产物生成的量来表示。; 酶活性的单位是指在特定的条件下，使酶促反应达到某一速度所需要的酶量。;1.惯用单位 由方法的作者自己规定在某特定 条件下生成一定量的产物为一个单位。2.国际单位（IU） 在规定的实验条件下，每分钟催 化1μmol底物发生反应的酶量。3.Katal 1 Katal是指在最适宜的条件下，  每秒钟催化1mol底物发生反应的酶量。;酶活性单位的计算;酶促反应进程曲线;Vm; Vmax [S] 米-孟氏方程式： V =  Km + [S] ;1. v = V[S] /Km + [S];Km和Vmax的测定(双倒数法);1;酶活性测定的方法; 优点 酶促反应已终止，比色计无需恒温装置，不必考虑显色剂对酶的影响。 缺点 无法了解酶作用这段时间里反应是否外于线性期。; 每隔一定时间（10～60秒）连续测定酶促反应中某一产物或底物变化量称为连续监测法。优点 容易找到线性期、结果可靠、省时、省试剂、省样品缺点 反应速度易受温度、pH、底物浓度等因素的影响。; 酶学分析是将酶作为试剂的一种分析技术，它包括： 1.借助酶来测定某化合物 2.借助酶来测定另一种酶特点：专一 高效 灵敏 温和; 在许多酶促反应中，底物或产物的变化量很难直接测定，常需要在反应体系中加入一种或一种以上的酶作为试剂。使第一个酶促反应的产物转变为易于检测的第二个酶或第三个酶的底物，通过这种偶联反应间接测定第一个酶的待测物浓度或待测酶的活性，这种作为试剂用的酶称为工具酶。;酶偶联测定法; 将水溶性的酶，通过物理或化学的方法，使其吸附、包埋或共价结合在固相载体上，成为不溶于水但仍保留催化活性的酶的衍生物称为固相酶。优点：可反复使用 机械强度大 稳定性好 抗干扰性强 ; 名称 室温 4 ℃ -20℃乳酸??氢酶 7 7 30 天冬氨酸氨基转移酶 2 14 30丙氨酸氨基转移酶 2 14 30肌酸激酶 0.3 0.6 2碱性磷酸酶 0.5 6 600淀粉酶 2 60 60;同工酶的产生机理; 电泳法层析法免疫化学法动力学法热失活法;;血浆酶的来源;酶活性测定在临床诊断中的应用;在骨骼疾病诊断中的应用 ALP 在肌肉疾病诊断中的应用 AST、CK、LDH、ALD 在前列腺疾病诊断中的应用 ACP 在肿瘤诊断中的应用;（一）样品 1.溶血 2.抗凝剂 3.样品存放的时间和温度（二）测定条件 1.温度 2.pH 3.缓冲液的性质