输血相关传染病检测技术概述培训教材.pptVIP

1.1 形态与结构 HCV病毒体呈球形，直径小于80nm（在肝细胞中为36-40nm，在血液中为36-62nm），为单股正链RNA病毒，在核衣壳外包绕含脂质的囊膜，囊膜上有剌突。HCV体外培养尚未找到敏感有效的细胞培养系统，但黑猩猩对HCV很敏感。 1.2 HCV基因结构与功能 丙型肝炎病毒是单股正链RNA病毒．其基因组含有一个大约9033个核苷酸构成的大开放读码框(0RF)，可编码3010—3033个氨基酸的多蛋白前体，多蛋白N端的1／4依次为核心蛋白(c)和包膜蛋白(El和E2)等结构蛋白，其余依次为NS2、NS3、NS4和NS 5等非结构蛋白 ，膜蛋白分布于病毒表面，NS3蛋白具有蛋白酶的功能，NS5蛋白为一依赖于RNA的RNA多聚酶． 1.3 HCV抗体的特点与临床意义 1 抗核心区抗体 抗-C22-3核心区抗体，核心区基因保守性强，其抗体出现较早（感染后8-10周），持续时间长，与HCV RNA高度相关，其血液有较大的传染性。 抗-HCe被膜区抗体，被膜区基因（E1，E2/NS1）变异程度高，其抗体可用于血清学分型，用于感染的流行病学研究。 1.3HCV抗体的特点与临床意义 2 抗非结构区抗体 抗-C33C 编码C33C多肽的基因位于NS3中区，与HCV的复制有关，用于HCV感染检测，抗-C33C 与抗-C22-3同时或稍早出现，两者对HCV感染具有互补作用，但不能相互替代。 抗-C100-3 C100-3多肽编码基因位于NS4区，从感染后4-32周出现，最长可达1年以上，对感染早期诊断意义不大，在鉴别急性、慢性感染和判断上有一定价值。但假阳性比例较高，血清中类风湿因子，过氧化物歧化酶、球蛋白、自身抗体等与多肽呈低亲和结合；标本放置过长或反复冻融也可出现假阳性。 抗-NS5 抗-NS5 持续阳性者，ALT多明显升高，而持续阴性者，ALT多正常或轻度升高，与疾病活动相关。 IgM抗体 先于IgG抗体出现，对感染早期诊断及急、慢性感染具有重要意义。 HCV感染后标志物出现的次序：HCV RNA（2周）→ALT （4周）→抗体-NS5 （6周）→抗-C22-3 （7周）→抗-C33C （8周）→抗-C100-3 （9周） 1.4丙肝感染后标志物的产生 2 丙肝病毒微生物学检查法 酶联免疫吸附实验ELISA 放射免疫测定法RIA 重组免疫印迹实验（确认实验） 血清HCV RNA检测 双抗体夹心法测HCV病毒抗原 2.1丙肝抗体ELISA检测 第一代抗-HCV试剂盒 采用的抗原C100-3 是HCV非结构基因(NS3／NS4)和人超氧化物歧化酶基因嵌合后表达的融合蛋白，灵敏度低，漏检率较高； 第二代抗-HCV试剂盒 在第一代基础上增加了核心区重组蛋白C22-3和NS3区重组蛋白-C33C，虽然在灵敏度和特异忡上有很大改善，但仍不能排除由于重组融合蛋白带来的少数假阳性和极少数的漏检 。 第三代抗-HCV试剂盒 其包被抗原为HCV核心抗原、NS3、NS4和NS5抗原，特异性超过99％，虽然目前缺乏判断其敏感性的金标准，但对于免疫功能正常的HCV RNA阳性感染者， 抗一HCV检出率也高于99％。 2.2丙肝病毒核酸RNA的检测 HCV RNA检测包括定性和定量两种，定性PCR的灵敏度高于定量PCR，因此定性PCR主要用于急慢性丙型肝炎诊断，而定量PCR则用于疗效监测．但该方法在技术和设备上要求较高，且费时，检出率较低，主要原因是：HCV在血液和肝组织中的感染滴度很低，且有一定波动：HCV RNA易被血细胞中的RNA酶降解，因此如果被检标本保存不当(例如反复冻融)将影响检测结果：HCV RNA还受进食的影响，易与血中脂质及脂蛋白结合，降低检出率：另外，RT-PCR的多步骤实验中任何步骤的问题均易影响其检出．该方法也容易因污染而出现假阳性。 为了使HCV RNA的规范化检测：对患者在空腹条件下抽血，及早分离血清和进行检测，避免对标本反复冻融，PCR的整个过程应避免RNA酶及DNA酶对标本的降解和对模板的污染。 2.3丙肝病毒核心抗原的检测 HCV核心抗原的检出比抗一HCV的检出约早49 d，用双抗体夹心法定性或定量检测血清样品中总的或游离的HCV核心抗原，方法简单、时间短、对环境要求低以及假阳性率低的特点。 用途：可用于HCV血清学转换前的早期急性丙型肝炎诊断、抗一HCV阳性感染者的病毒血症分析以及HCV感染者治疗前后病毒血症追踪分析等。 局限性：由于方法敏感性的限制，HCV RNA水平低于20 000 kTU／L时不适用。 3检测丙肝时常见问题 假阳性比较高 HCV基因组的变异较大 血清中抗-HCV出现较晚 不同厂家的试剂对同一标本检验结果存在差异 梅毒螺旋体的检测技术