实时荧光PCR在人乳头瘤病毒临床检测中的应用.docVIP

PAGE PAGE 1 实时荧光PCR在人乳头瘤病毒临床检测中的应用 　　[摘要]目的分析和探讨实时荧光PCR技术在人乳头瘤病毒（HPV）中的检测价值。方法随机选取2010年10月～2011年10月于本院妇产科接受诊治的人乳头瘤病毒感染患者102例，分别使用第二代杂交捕获法（HCⅡ）和实时荧光PCR对102例患者的标本进行检测，结合患者的病理资料对两种检测方法的结果进行比较分析。结果病理资料显示本组病例中宫颈上皮内瘤变（CIN）的有38例，慢性宫颈炎和鳞状上皮病变的36例，HCⅡ和实时荧光PCR对CIN的HPV阳性检出率分别为86.84%和94.74%，对慢性宫颈炎和鳞状上皮病变的阳性检出率分别为36.11%和58.33%；HCⅡ的HPV总阳性检出率为62.75%，实时荧光PCR为71.57%，两组比较差异具有统计学意义（P0.05），两种方法的总符合率为82.35%；两种手段在高危型宫颈病变的检测具有较好的相关性，实时荧光PCR的灵敏性和特异性要略好于HCⅡ。结论实时荧光PCR和第二代杂交捕获法是临床上检测人乳头瘤病毒的有效方法，实时荧光PCR具有较好的灵敏性和特异性，为宫颈类疾病的早发现和治疗提供可靠的依据。 　　[关键词]实时荧光PCR；第二代杂交捕获法；人乳头瘤病毒；检测 　　[中图分类号]R737.33[文献标识码]A[文章编号]1674-4721（2013）03（a）-0076-03 　　大量的临床研究报道证实人乳头瘤病毒（HPV）是导致女性宫颈癌和癌前病变的主要病毒，调查显示宫颈癌患者的标本HPV检出率已经超过了90%，因此做好人乳头瘤病毒的检查诊断对宫颈疾病的预防和治疗有着极其重要的临床价值[1]。国际癌症组织对世界多个国家地区的宫颈癌进行了调查研究，发现该类病毒主要有15种高危型DNA，HPV16、HPV18和HPV58是我国最为常见的三种高危型病毒[2]。目前第二代杂交捕获法是检测HPV的主要方法，随着生物技术的进步发展，实时荧光PCR技术的出现为DNA的临床检测提供了简便和快捷。本次研究主要对第二代杂交捕获法和实时荧光PCR的检测结果进行了比较分析，以期为临床诊断HPV提供参考，现总结如下： 　　1资料与方法 　　1.1研究对象 　　随机选取2010年10月～2011年10月于本院妇产科接受诊治的人乳头瘤病毒感染患者102例，年龄24～60岁，平均（34.8±2.6）岁；临床细胞检查结果：低度鳞状上皮细胞内病变患者40例，高度鳞状上皮内病变患者16例，不典型鳞状细胞46例；所有患者均无其他严重的生殖系统疾病，本次检查已征得患者的同意。 　　1.2试剂和仪器 　　本次试验所用的主要试剂盒器材如下：美国Digene公司提供HPV-DNA试剂盒、HCⅡ基因杂交信号扩大系、子宫颈采样器，Xygen公司提供的微孔板封面胶膜和圆底96孔酶标板；上海复星诊断公司提供的高危型HPV实时荧光PCR试剂盒和实时荧光PCR仪（Line-GeneFQIN33A型）。 　　1.3试验方法 　　采取对照性试验进行分析探讨，分别使用第二代杂交捕获法（HCⅡ）和实时荧光PCR对102例患者的标本进行检测，结合患者的病理资料对两种检测方法的结果进行比较分析。 　　1.4检测方法 　　1.4.1第二代杂交捕获检测本方法可对13种高危型HPV进行同步检测，根据试剂盒说明书进行相应的试验操作，首先是对标本DNA解链，将解链后的单链DNA与RNA探针杂交，得到DNA-RNA的杂交体，杂交体可同微孔壁特异性抗体进行结合，磷酸化抗体后信号放大，底物经碱性磷酸酶作用后发光，通过发光的强弱来对微孔壁上磷酸酶含量进行测定，最后获得特异性结合杂交体含量。如果HPV负荷量超过1.0pg/mL则可判定为发生HPV阳性感染。 　　1.4.2实时荧光PCR检测不同探针和引物（3端和5端分别标有荧光淬灭基团和荧光报告基团）需要在特异性碱基区和模板作用，Taq酶能够将探针降解，此时荧光报告基团可以摆脱荧光淬灭基团，增强荧光信号，通过定量PCR仪动态检测标本荧光信号，确定其型别。实时荧光PCR剂盒也可对13种高危型HPV型进行检测，其操作流程主要根据试剂盒说明书实施，大概步骤：样本DNA的提取-实时荧光PCR反应液的配置-样本实时荧光PCR扩增和检测-根据荧光值判定反应结。 　　1.5统计学方法 　　所得数据采用SPSS12.0统计软件进行分析处理，计量资料用x±s表示，采用t检验或χ2检验对相关数据进行比较分析，P0.05表示差异有统计学意义。 　　2结果 　　2.1不同程度宫颈病变的HPV阳性检出率 　　病理资料显示本组病例中宫颈上皮内瘤变（CIN）的有38例，慢性宫颈炎和鳞状上皮病变的36例，HCⅡ和实时荧光PCR对CIN的HPV阳性检出率分别为86.84%