下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究教学教材.pptVIP

* 下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点r研究 专 业： 口腔正畸学 导 师： 王小琴 教授 研 究 生： 赵 华 前言 材料与方法 结果 讨论 结论 前言 Allwright and Bundred通过流行病学调查显示在亚洲人群中下颌前突(Mandibular Prognathism,MP) 患病率较其他地区相对较高，大约为8-40% 但是其致病原因至今仍不清楚。 2007年，余兴华等人对MP患者和正 常下颌患者进行了生长激素受体基因单 核苷酸多态性分析。 另外还有许多学者在研究与下颌骨 发育有关的基因，比如Shh﹑Nell-1﹑ Ptc等。 结果发现了一个位于第10外显子的 1673位SNP位点碱基突变类型为腺嘌呤 (A)→胞嘧啶(C)。 国内研究现状 Nell-1基因 目前对 Nell-1 基因的研究主要集中在骨组 织工程学方面，基因改变研究未见报道。 本实验对105例（实验组60例，对照组45例）受试者的Nell-1基因SNP位点r行了初步研究。 SNP位点 基因 G C 蛋白质 Glu Asp 天冬氨酸 谷氨酸 研究目的 探讨Nell-1基因单核苷酸多态性 位点r下颌前突与正 常人群之间的差异 为下颌前突的病因学机制提供理 论基础。 材料与方法 仪器及材料 厂家 PCR扩增仪 深圳泰立仪器仪表有限公司 紫外凝胶分析系统 UVP 凝胶电泳仪 Hoefer Scientific Instruments Hinf Ⅰ限制性内切酶 Fermentas life sciences 引物 生工生物工程有限公司 实验试剂与仪器 研究对象 满足以下条件的进行头颅侧位片测量： 均为汉族人，且没有异族通婚史 双侧颌面对称，无面部畸形 无不良习惯及替牙障碍 均为成年人，无外伤史，无手术史 纳入标准 对照组(正常)：SNA 、SNB、 ANB、上颌长、 上颌位置、MP-FH 在正常范 围之内， 2°＜ANB＜4° 实验组( MP ) ：SNA、上颌长、上颌位置、 MP-FH在正常范围之内， ANB＜0°。 实验组60人 对照组45人 采静脉血5ml 提取全部DNA 设计相应目的基因的引物 PCR扩增目的基因 Hinf Ⅰ酶切 统计学分析 实验步骤 DNA提取采用TKM血细胞DNA快 速提取法 DNA提取 目的基因引物的设计 引物的设计采用Printer 3.0软件 上游引物：gcttccagggtggagtttta 下游引物：cacagagttttggacccatgt 50μLPCR反应体系 试剂名称 剂量 10×Buffer 5μL MgCl2(25mM) 4μL dNTP(10mM) 1μL 上游引物(10μM) 1μL 下游引物(10μM) 1μL Taq酶 0.4μL 模板DNA 10μL 三蒸水 28μL PCR反应参数 温度（℃） 时间 预热 94 2min 变性 94 20s 退火 56 30s 延伸 72 30s 循环次数 36次 1 SspI?aat|att13???????????? 1?tctttccctaatatttggcttccagggtggagttttagtaaaaattacagaaatgtgtcc???? 61?MboII?n|nnnnnnntcttc84??????????????????? 61?NdeII?|gatc83?????????????? ???? 61?MboI?|gatc83??????HinfI?g|antc101 ?61?tcctttgaactgctcagaaaaggatcacattcttcctgagaatcagtgctgccgtgtctg??? 121?MboII?n|nnnnnnntcttc167 121?tagaggtaagtgggcttggtggtgggccatgcgtggggtgaggctggggctggtcttctg 181?gggcatgagattttaatgaatagtatgataataacatgggtccaaaactctgtgcgctgc 酶的确定 Hinf Ⅰ 5’ … G A N T C … 3’ 3’ … C T N A G … 5’ 统计学分析