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双虎清肝颗粒研制情况综述 中国中医研究院西苑医院 陈立华 双虎清肝颗粒是98年经中华人民共和国卫生部批准治疗乙型肝炎的新药，已全面上市。现从双虎清肝颗粒的研制过程、处方组成，毒理学、药效学及临床研究结果等方面进行简要的综合。 一、 项目来源 中国中医研究院自六十年代开始，即组成以岳美中（已故）为首的肝病研究组与302医院进行中医中药为主治疗肝炎的临床和基础研究，在承担国家“六五”和“七五”肝病重点科研项目中，进行了更深入的研究。“双虎清肝颗粒”就是我院长期对肝病进行研究的重要成果。 二、双虎清肝颗粒主要研究项目与结果 （一）处方与工艺 1、处方组成：银花、虎杖、黄连、白花蛇舌草、丹参、紫花地丁、枳实、甘草等十二味。 本方系中国中医研究院西苑医院陈立华教授等根据岳美中、方药中老中医生前治疗乙型肝炎的经验整理而成，经“六五”“七五”攻关及之后的长期临床使用，疗效较好。 本方针对湿热疫毒蕴伏体内，久而未去，形成疫毒热盛、痰湿中阻、气滞血瘀的证候，采用清热解毒，燥湿化痰、理气活血的治法组方：以银花和虎杖为君药，兼清气血之疫毒；黄连、白花蛇舌草等为臣药，清热解毒，燥湿化痰；丹参、野菊花、紫花地丁、枳实等为佐药，理气活血、清热解毒，燥湿化痰；甘草为使药，集解毒、化痰、调和于一身。清热解毒药中既有银花、白花蛇舌草等的甘苦寒，又有虎杖之苦寒，紫花地丁等辛苦寒，兼有清热解毒，活血凉血和利湿之功；黄连、枳实等为“小陷胸加枳实汤”，辛开苦降，具有燥湿化痰，“专开心下苦闷”的作用；丹参、枳实活血行气；全方具有较强的清热解毒、燥湿化痰、理气活血之效。 2、工艺 制剂工艺研究主要根据各药物有效成份的理化性质，设计蒸馏法提取野菊花中挥发性成分；乙醇回流提取法提取虎杖、丹参脂溶性成分；水煎煮法提取多味中药的有效成分。对易煎煮，受热易破坏的成分进行煎煮时间的考察；对主要工艺通过三水平、四因素正交试验，优选出较佳提取工艺。 (二)药效学研究： 1、双虎清肝颗粒的抗病毒作用： （1）5、7.5g/kg（生药）的双虎清肝颗粒灌胃给乙肝病毒感染的鸭，可显著抑制鸭血清中乙肝病毒DNA的复制 （2）双虎清肝颗粒5mg/ml的浓度，能抑制鸭乙肝病毒感染的原代培养肝细胞中DHBV-DNA的复制（58.21%）。 （3）双虎清肝颗粒按1.25mg/ml的浓度，可完全抑制流感病毒甲、乙型空斑形成（100%）；5 mg/ml的浓度时，能抑制单纯疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ型空斑形成，其抑制率分别达100%和92%。 2、双虎清肝颗粒对CCl4所致中毒性肝损伤的保护作用： （1）双虎清肝颗粒可减轻急性肝损伤SGPT的升高，减轻肝细胞浊肿的程度及肝细胞坏死的发生。 （2）双虎清肝颗粒可减轻慢性肝损伤大鼠肝指数的升高(P0.05)、明显减轻肝细胞浊肿程度（P0.05）和脂肪变性的发生程度（P0.05）。 3、双虎清肝颗粒对小鼠免疫功能的作用： （1）双虎清肝颗粒能显著提高以SRBC和流感病毒为抗原的小鼠体内产生抗体的反应（P0.05）。 （2）双虎清肝颗粒能提高正常的和免疫功能被抑制的小鼠对SRBC抗原的足跖迟发性变态反应，在体外对ConA诱导的脾淋巴细胞增殖有双向作用。 （3）双虎清肝颗粒能提高小鼠网状内皮细胞清除血液中异物的功能(P0.05)和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的功能(P0.05)。 以上结果证明：双虎清肝颗粒有抗乙型肝炎病毒、流感病毒及单纯疱疹病毒的作用；对由CCl4引起的中毒性肝损伤有保护作用以及调节小鼠体液免疫、细胞免疫及非特异性免疫功能的作用。 (三)毒理实验： 1、双虎清肝颗粒的急性毒性试验及结果：该药毒性低，测不出LD50值，用健康的Laca小鼠26只测定最大耐受量。 双虎清肝颗粒以最大浓度(1.8g/ml生药)，最大体积(0.5gml/10 g体重)，一日内灌胃给药三次，连续观察七天，未发现任何毒副反应和死亡现象。一日内最大耐受量为270 g/kg体重（生药），约相当于成人日剂量的203倍。 由此证明该药无毒性。 2、双虎清肝颗粒长期毒性试验及结果：用健康Wistar种大鼠88只进行长期毒性试验。试验动物随机分四组，以32、16及8 g/kg(生药)的剂量灌胃给药，一日一次，一周6次，连续给药6个月，观察该药对动物一般状况、发育、血象、心、肝、肾功能等主药脏器的影响。结果表明：给药组动物与正常对照组一样，一般状态良好，发育正常，无死亡；给药组红细胞、血红蛋白、白细胞及分类以及血小板均属正常生理范围之内，与正常对照组无明显差异；给药组肝肾功能、心率和心电图、主要脏器指数与正常对照组比较无显著差异；心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、大小肠、生殖器等脏器经肉眼和病理组织学检查，未发现任何中毒性病变，均属正常。 以上结果证明该药安全无毒。 （四）质量标准： 双虎清肝颗粒的质量标准是