硅霜微生物限度检查方法学验证.docVIP

硅霜微生物限度检查方法学验证 　　 　　硅霜微生物限度检查方法学验证是小编为大家带来的论文范文欢迎阅读 　　 　　【摘要】目的验证硅霜微生物限度检查方法的专属性和有效性 　　 　　方法采用直接接种法和培养基稀释法对硅霜进行验证试验并测算菌回收率结果硅霜以直接接种法检查白色念珠菌、黑曲霉菌的菌回收率70%采用培养基稀释法后金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的菌回收率70%结论硅霜可以用直接接种法进行控制菌、霉菌及酵母菌总数检查以培养基稀释法测定细菌总数 　　 　　【关键词】硅霜;微生物;限度检查;验证 　　 　　硅霜用于治疗皲裂、皮炎并能防止银宵病治愈后复发主要是护肤防裂为保证药品质量按照中国药典版[1]的要求对其微生物限度检查方法进行验证如下 　　 　　1实验材料 　　 　　1.1培养基:培养基均购自中国药品生物制品检定所 　　 　　1.2菌种:大肠埃希菌(CMCCB44102)第2代枯草芽孢杆菌(CMCCB63501)第2代金黄色葡萄球菌(CMCCB26003)第2代白色念珠菌(CMCCF98001)第2代黑曲霉菌(CMCCF98003)第2代 　　 　　1.3稀释液:pH=7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液 　　 　　1.4样品:硅霜(060206030604牡丹江市皮肤病防治研究所) 　　 　　2方法 　　 　　2.1直接接种法供试液制备:取供试品10g三份加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯和无菌玻璃珠的容器中充分振摇使供试品溶解然后加入40℃～45℃的PH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液至100ml振摇5～10分钟萃取静置使油水明显分层取其水层作为1：10的供试液取2mL分别加入置2个平皿中 　　 　　2.2直接接种法菌液制备:取1∶10供试液2mL分别加入置2个平皿中再分别加入大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌50～100个菌/mL的菌液1mL作为加阳性菌供试液样每种菌制备2份 　　 　　2.3培养基稀释法供试液的制备:将1∶10供试品溶液1mL分别注入10个平皿中每个0.1mL10个为一组共两组 　　 　　2.4培养基稀释法加阳性菌供试液的制备:将1∶10供试品溶液1mL分别注入10个平皿中每个0.1mL10个为一组再分别加入大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉50～100个菌/mL的菌液1mL每种菌株两组 　　 　　2.5操作步骤 　　 　　2.5.1直接接种法:取1∶10供试液2mL注入2个平皿中分别加入大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉50～100个菌/mL的菌液1mL作为加阳性菌供试液样每个菌制备2个平皿 　　 　　2.5.2培养基稀释法:将1∶10供试液2mL分别注入20个平皿再分别加入大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌50～100个菌/mL的菌液1mL每组10个平皿每个菌株两组分别加入已溶化保温至45℃营养琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基15mL每1mL供试品溶液所注的平皿中生长的菌落之和为1mL计算每1mL供试品溶液的平均菌落数按平皿法计数规则报告菌落数 　　 　　2.5.3大肠埃希菌检查:取1∶10供试品溶液10mL接种于胆盐乳糖培养基中培养24h取上述培养物0.2mL接种至含5mLMUG培养基的试管内培养于5、24h在365nm紫外线观察同时用未接种的MUG培养作本底对照管内培养物呈现荧光为MUG阳性;不呈现荧光为MUG阴性 　　 　　2.6培养:各平皿培养基凝固后细菌检查平皿置30～35℃培养箱48h霉菌检查平皿置23～28℃培养箱72h 　　 　　2.7样品微生物限度测定:取供试品10mL加pH=7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲溶液90mL混匀分别按常规法和培养基稀释法各3份进行操作 　　 　　3结果 　　 　　硅霜以常规方法检查金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念球菌、黑曲霉各菌的平均回收率分别为60.5%、44.3%、67.4%、95.4%、98.0%该样品对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的检出均有影响而对白色念球菌、黑曲霉的加样回收率均高于70%故认为常规法测定霉菌和酵母菌总数是符合中国药典年版的要求的;采用培养基稀释法金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌各菌的平均回收率分别为86.2%、95.6%、88.8%均高于70%故认为培养基稀释法测定细菌总数是符合中国药典版的要求的 　　 　　控制菌检查硅霜无明显的影响故控制菌采用常规法进行检验 　　 　　4结论 　　 　　硅霜可以使用常规法即直接接种法进行控制菌、霉菌及酵母菌总数检查以培养基稀释法测定细菌总数检查 　　 　　参考文献 　　 　　[1]中国药典年版二部[S].