园艺植物多倍体育种.pptVIP

实验二 园艺植物多倍体的诱导 一、实验目的：1.学生要提早自主制定诱变的植物种类、具体的材料、处理方法、秋水仙素浓度、处理时期、时间以及今后田间观察对比等详细的方案。（要去图书馆检索文章资料，要有一定的依据。）2.明确多倍体植物在细胞、组织、器官上的巨大性，明显大于二倍体植物。 二、实验性质：设计型 三、实验原理： 人工诱导多倍体的方法 物理方法：温度剧变、机械损伤、射线处理、 高速离心； 化学方法：秋水仙素、富民隆、笑气、一些除 草剂等；生物方法：杂交、细胞融合、组织培养。  化学诱变剂 秋水仙素是从百合科植物秋水仙的根、茎、种子等器官中提炼出来的一种药剂。积水仙素是淡黄色粉末，纯品是针状无色结晶性，性极毒，融点为155℃，易溶于水、酒料、氯仿和甲醛中，不易溶解于乙醚、苯。 秋水仙素属剧毒物质，配制和使用时，一定要注意安全，避免秋水仙素粉末在空中飞扬，以免误入呼吸道内；也不可触及皮肤。可先配成较高浓度溶液，保存于棕色瓶中，盖紧盖子，放于黑暗处，用时再稀释。 秋水仙碱的毒性较大，常见恶心、呕吐、腹泻、腹痛、胃肠反应是严重中毒的前驱症状，症状出现时即行停药，肾脏损害可见血尿、少尿、对骨髓有直接抑制作用、引起粒细胞缺乏、再生障碍性贫血。 秋水仙素诱导多倍体的原理 细胞有丝分裂时，秋水仙素可抑制微管的聚合过程，不能形成纺锤丝，使染色体不能排在赤道板上，也不能分向两极，从而产生染色体数加倍的核。 影响秋水仙素诱导多倍体的因素1、实验材料2、秋水仙素浓度  由于秋水仙素是有毒物质，高毒性限制了其使用剂量和材料的诱变效率。即：在一定范围内，秋水仙素试剂浓度与加倍效果成正相关，但秋水仙素浓度过高，会使值物材料造成药害，抑制甚至杀死植物材料的生长。 影响秋水仙素诱导多倍体的因素3、浓度与处理时间的影响  不同材料对秋水仙素敏感度有差异，选择合适的浓度和处理时间对诱导染色体加倍至关重要。 影响秋水仙素诱导多倍体的因素 4、温度 温度对秋水仙素水解速度有很大影响，在低温下能保持一定的稳定性，保证它与材料发生作用。当温度增高时可促进秋水仙素在体内的反应速度和作用能力，促进染色体加倍，加深组织药害。 影响秋水仙素诱导多倍体的因素 5、其他因素 如秋水仙素与二甲基亚砜(DMSO)以及细胞分裂素配合使用，能有效提高加倍频率。秋水仙素溶液中加DMSO等低分子量中性的溶质，DMSO等能缓慢渗透到细胞质内部，使秋水仙素作用面加大。 四、实验内容： 1.学生自主设计实验方案，由指导老师审阅并在实验室指导实施；2.田间种植观察，形态鉴别初步获得多倍体的植株； 五、方法步骤： 1 ．多倍体的诱导 1 ）秋水仙素溶液的配制 称取 1g 秋水仙素粉末，先溶于少量酒精中，然后加冷水定容至 100ml ，配成 1 ％质量浓度的母液，装于棕色瓶内， 1 ～ 4 ℃冰箱保存备用，使用时再稀释成所需要的浓度。  2 ）秋水仙素处理 ① 浸渍法：可浸渍幼苗、新梢、腋芽、插条、接穗、种子等。对种子进行处理时，先用清水浸种（发芽慢的种子应催芽），使种子处于萌动状态；然后用 0.1% ～ 0.5% 的秋水仙素溶液浸泡种子，一般处理 24h 左右；浸泡后用清水洗净，略阴干后播种，为了促进生根，可在处理液中加入适量的生长素。 2 ）秋水仙素处理 ② 滴液法：对幼苗进行处理，待子叶展开时，将 0.1% ～ 0.5% 的秋水仙素溶液滴在生长点上，每天早中晚各滴一次，连续处理 2 ～ 3d 。为使药液不会很快蒸发，提高处理效果，可在幼苗生长点处放一脱脂棉球，将秋水仙素溶液滴在棉球上。如天气干燥、蒸发快，中途可滴加蒸馏水保持药液浓度；处理结束后，用清水冲洗数次，将植株上残存药液充分洗净。  2 ）秋水仙素处理 ③ 涂抹法：用羊毛脂、琼脂或甘油将秋水仙素按一定浓度配成乳剂，涂抹在幼苗或枝条的顶端，处理时间 24 ～ 48h ；处理部位要适当遮盖，以减少蒸发和避免雨水淋洗。  2 ）秋水仙素处理 ④ 注射法：采用微量注射器将一定浓度的秋水仙素溶液注入植株的顶芽或侧芽中。 ⑤ 离体法：在组织培养过程中，将适量的秋水仙素加入培养基，经短期培养后，再转入无秋水仙素的培养基中继续培养，便可获得多倍体。此法诱变率高，易得到同质纯合的多倍体。 2 ．多倍体的鉴定 一般采取先间接鉴定，再直接鉴定的方法。 1 ）间接鉴定法 常采用的鉴定方法有 3 种。 ①　外部形态鉴定：观察四倍体与二倍体幼苗，从叶片厚度、颜色深浅、植株生长强弱等方面加以区别。一般多倍体表现为茎粗壮，叶厚而皱，叶色变深，生长速度减慢，花器变大等。  2