微生物设计实验-外部环境因子对大肠杆菌的影响.pptVIP

实验项目：外部环境因子对大肠杆菌的影响 意义： 大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，主要寄生在大肠内。它侵入人体一些部位时，可引起感染，如腹膜炎、胆囊炎、膀胱炎及腹泻等。 我们研究环境因子对大肠杆菌的影响有助于我们了解大肠杆菌的生长条件和影响因素。这对于实验操作、食品卫生和保存以及人类健康有一定的指导意义。 我们所采用的环境分为物理和化学2种，物理的紫外线是实验室经常采用的灭菌方法；化学中的高盐、高酸、高醇是日常生活中经常采用的食物的保存方法；而青霉素是我们最熟悉也是最常用的抗生素之一。 实验目的： 1加深对大肠杆菌的认识； 2 以及外界环境因子对大肠杆菌的影响，促使我们养成良好的卫生习惯。 3学会常规微生物实验操作方法，树立科学认真仔细的态度，培养团队科研协作精神。 仪器与试剂  1.?仪器设备：（1）灭菌器，超净工作台，培养箱、分光光度计，移液 枪。（2）棉花，报纸，记号笔，橡筋，纱布，便签。（3）试管12只，大三角烧瓶3个，20ml三角烧瓶2个，烧杯，量筒，玻棒，牛角勺各一个， 2药品与试剂： （1）牛肉膏，蛋白胨，NaCl，蒸馏水（2）1mol/L NaOH，1mol/L HCl（3）青霉素针剂1只，95%的酒精， 白醋， 饱和食盐水， 大肠杆菌菌种。 实验方法 1、配制牛肉膏、蛋白胨液体培养基250ml，分装到2个锥形瓶（200ml），12支试管中每管 5ml（2支备用）。一瓶蒸馏水。灭菌30min 2、接种大肠杆菌到两个20ml锥形瓶，培养箱恒温37度培养24小时 3、观察紫外线对大肠杆菌的影响 用移液枪取已经培养过24小时的大肠杆菌0.2ml接种到4支试管内，编号A\B\C\D A 经过紫外光照射5分钟后放入培养箱中。 B 经过紫外光照射15分钟后放入培养箱中。 C 经过紫外光照射25分钟后放入培养箱中 D 经过紫外光照射30分钟后放入培养箱中 E 对照组，将没有接种大肠杆菌的培养基也放在紫外光下照射30分钟后再接种大肠杆 菌，放入培养箱中 来研究是否是由于紫外光照射影响了培养基而抑制了大肠杆菌的生长。 4、酒精、青霉素 、白醋 、饱和食盐水对大肠杆菌的影响 F培养基上接种已经过24小时培养的大肠杆菌 （以下都为0.2ml） F1培养基上加入1ml的青霉素然后将经过24小时培养的大肠杆菌接种上 F2 培养基上加入1ml的95%的酒精然后将经过24小时培养的大肠杆菌接种在其上。 F3培养基上加入1ml的白醋然后接种上大肠杆菌 F4培养基上加入1ml的饱和食盐水然后接种上大肠杆菌 5、将上述的A 、B 、C 、D、 E、 F 、F1 、F2 、F3 、F4 10个培养基放入培养箱中培 养24小时后，测量其光密度值，F组作为参照组。 6、总结实验结果，分析原因。 实验结果1 紫外光照射后，对各个试管中的大肠杆菌培养液进行光密度的测定，测定结果如下： A 0.682 B 0.589 C 0.529 D 0.459 E 0.623 实验结果 粗略看，前六组数据比较接近，后四组结果比较接近 提取前六组数据做折线图 A-E五组数据取平均值为： （0.682+0.589+0.529+0.459+0.623）/5=0.5764 平均值与不做处理的数值0.559相近，与初始的设想有极大差异。后面将从从紫外线杀菌原理、比浊法原理和吸光度原理分别分析。 紫外线的杀菌原理:紫外线对细胞、病毒等单细胞微生物的照射，可以破坏其生命中枢DNA的结构，使构成该微生物的蛋白质无法形成，使其立即死亡或丧失繁殖能力，一般紫外线在1---2秒钟内就可达到灭菌的效果。基于紫外线杀菌原理的数据分析：我们试验中处理时间分别为：5min，15min，25min，30min，相互对照，而后面的3组是实验室采用的杀菌时间。紫外灯外的玻璃灯管是以天然水晶为材料制造，其透射率可以达到80%以上。另外空气受紫外线照射后产生微量臭氧具有杀菌作用，可导致微生物的死亡，但本实验中的试管也是封闭的，所以本实验紫外线对微生物作用的两种方式都受到影响。 实验结果2 没有经过任何消毒处理的大肠杆菌和经过不同消毒处理的大肠杆菌的吸光光度之比较 F :0.559 F1:0.026 F2:0.045 F3:0.054 F4:0.018 柱状图： 实验数据的数学分析 我们采用T检验数据分析法对小样本进行分析。 我们的4支经过不同时间紫外光照射的试管中大肠杆菌的生长情况和第五组的标准情况进行比较，用T检验的方