生物化学实验1.生物化学基本功训练.专科.pptVIP

Page ? * 生物化学实验课 前言 一、生物化学实验课的必要性 二、实验室守则 1.进入实验室必须穿实验服。 2.分组负责卫生。 3.实验之前要认真预习实验教材中相关实验内容。 4.爱护仪器设备。使用前仔细检查，使用后要将 所有东西都要洗刷干净，整理好，放回原处。 5.实验后，要认真完成实验报告。 6.注意安全！ 三、实验考试 实验成绩不及格不得参加理论课考试 报告书写 10分 实验操作考试 10分 出勤、实验室综合表现 10分 四、实验报告的书写 实验X 实验名称 实验日期 【实验目的】 【实验原理】 【试剂与仪器】 【实验步骤】 【实验结果】 【分析与讨论 】 【注意事项】 注意：每一小组（即一个试验台）写一份实验报告，在封面上写清楚组员姓名及学号。 实验一 生化实验基本功训练 一、目的： 1.掌握常用玻璃仪器洗涤及干燥方法 2.熟悉几种常用的液体混匀方法 3.掌握刻度吸量管及加样枪的使用 4.掌握分光光度技术原理及722G型分光光度计的使用 锥形瓶 试剂瓶 烧杯 一般玻璃仪器 容量瓶 滴定管 刻度吸量管 容量分析仪器 （一）常用玻璃仪器的清洗与干燥 二、内容 玻璃仪器清洗程序 一般玻璃仪器 毛刷刷洗 容量分析玻璃仪器 自来水冲洗 蒸馏水冲洗 2-3次 自来水冲洗 2-3次 洗液浸泡 （12-24h） 二、内容 （一）常用玻璃仪器的清洗与干燥 标准：倒置显示内壁，既无成滴水珠，也不成股流下。 （沾取洗涤剂稀释液） （铬酸洗液） 玻璃仪器的干燥 ①自然干燥： 将洗净的玻璃仪器倒置在架子上使水沥净，室温下干燥 ②加热干燥: 不可高温干燥； 一般在105 ℃ -120 ℃烘箱中干燥。 容量仪器分析量器如需即用，只能在60℃以下干燥； （二）液体的混匀 1.旋转混匀法 反应物量小，反应时间短，小口径容器 2.弹动混匀法 适用于试管内的混匀 3.倒转混匀法 适合具塞的容器，如容量瓶，磨口试剂瓶 4.滴管混匀法 用滴管将溶液反复吹打数次 5.玻棒搅拌混匀法 大口径或大容量的容器 “选、拿、取、调、放、洗” （1）选：就是刻度吸量管的选择。 （2）拿：就是如何来拿这个刻度吸量管。 （3）取：吸取液体 （4）调：放掉多余液体，调整刻度到所需要的液体体积 （5）放：垂直放液，吸量管是否标有“吹”字 （6）洗：洗涤 （三）液体的量取 1.刻度吸量管 注意：靠近原则、三点一线 2.微量吸量管（加样枪） 2.微量吸量管（加样枪） 选：首先看枪的最大量程， 调：旋转调试到需要的量程 拿：大拇指按住上面的按钮至第一档位 取：枪头插入试剂液面下缓缓松开拇指按钮，吸取液体 放：把枪头插入要加入的试管，拇指按下枪头，要用力按至第二档位。 收整：使用完毕，把枪调到最大量程，这样有利于枪的保养。 注意：轻取重放 （四）光谱光度分析技术 1.概念： 光谱光度分析技术是根据物质具有吸收或发射辐射能的性质，通过测量物质所产生的发射光、吸收光或散射光的波长和强度而建立起来的一种分析方法。 优点：灵敏度高，测定简便，快速等优点，是最为常用的一种生化检测技术。 2.分类： 根据分析物质光谱的不同分类 利用物质的吸收光谱：比色法、分光光度法 发射光谱：火焰法、荧光光度法 光散射：比浊法 3.分光光度法 概念：分光光度法是通过测定被测物质在特定波长或一定波长范围内的吸光度，对该物质进行定量和定性分析的方法。 分类： 可见分光光度法 （400-760nm） 紫外分光光度法 （200-400nm） 基本原理：朗伯-比尔定律（Lambert-Beeer） 朗伯比尔定律――光的吸收定律 当一束平行的单色光通过均匀、无散射现象的溶液时，在单色光强度、溶液的温度等条件不变的情况下，溶液吸光度与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比。溶液的浓度愈大，则光被吸收得愈多。通过的液层厚度愈大，则光被吸收得愈多。 A=KCL Ａ：吸光度：可以作为衡量光被吸收程度的一个物理量，吸光度越大，说明被溶液所吸收的光越多。 Ｃ：物质的浓度 Ｌ：液层厚度。 Ｋ：吸光系数，是一