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DB
河北省地方标准
玉米杂交种及自交系、小麦种子纯度检验方法
一一蛋白质电泳法
D B13/ T221一94
1994-11--21发布 ___ 1994一12一01实施
河北省技术监督局发布
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河北省地方标准
玉米杂交种及自交系、小麦种子纯度检验方法
一一蛋白质电泳法
D B13/T221-94
主题内容与适用范围
本标准规定了蛋白质电泳技术快速测定种子纯度原理和试验方法。
本标准适用于玉米杂交种、玉米自交系和小麦种子。
2 引用标准
GB8170数值修约规则
GB3543农作物种子检验规程
3 术语
3.1特征蛋白质,某一品种的作物种子所含有的特定的不同于该作物其它品种的基因,该基因所决定的
蛋白质也就不同于其它品种的蛋白质,因此定为特征蛋白质。
3.2 纯度
本品种的种子粒数占供检样品总数的百分率即为供检品种纯度。
4 原理
将玉米或小麦种子贮存蛋白质利用电泳技术进行分离,得到蛋白质指纹图,根据玉米或小麦品种的
特征蛋白质进行品种鉴定,然后计算出纯度。
5 试验方法
5.1仪器设备
5.1.1稳压稳流电泳仪0-600V 0 .200m A
5.1.2双板夹心电泳槽
5.1,3高速离心机:最高转速为1600。转/m in
5.1.4天平,称量2009,分度值10mg
5.1.5微量进样器0-50 P1
5.1.6注射器0~2ml
5.1.7 50ml锥形瓶
5.1.8带盖搪瓷盘
5.1.9 移液管0-10ml
河北省技术监.局1994-11-21批准 1994-12=01实旅
一 1一
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DB13/T221--94
5.1,10吸液器0 -10m1
5.1.11医用X光片观察仪
5.1.1Q可调徽最取样器0-1"200”1
5.1.13 1,5ml离心管、吸液尖
5.1.14液体快速混合器
5,2试剂和材料
5,2.130肠丙烯酸胺(Acry)-N-N一甲叉双丙烯醉胺(Bis·)母液
称取150.OOg A cry.和4.OOgB is·,溶于300M I热蒸姗水中,趁热过滤,并定容到500m 1,低温保
存(0-4OC)(5.2.2, 5.2.3, 5.2.4, 5.2.5保存条件相同)
5.2.21090过硫酸钱
称取1.009过硫酸钱,溶于l Om】水中
5.2.3 TEMED:用原液
5.2.4 蛋白质提取液
9.00g SUP溶于150m 1水中
5.2.5 1肠甲基绿指示剂
1.009甲基绿溶于少许乙醇,然后加入I OOM 150呱的甘油溶液,摇匀即可。
5.2.6阳极室电泳液:吸取4ml乳酸溶于500m 1水中。
5.2.7阴极室电泳液:称量3.009Tr is,并吸取2ml乳酸溶于500 m 1水中。
5.2.8脱色液
乙醇:冰乙酸:水=20 e 7 : 73
SA.9 0.5呱的考马氏亮蓝R250染色液
1.009考马氏蓝溶于少许乙醇,加入200M I脱色液即可(染色时稀释10倍)
5.3试验步骤
5.3,1扦样 扦样及平均样品的制备,按GB3543执行。
5.3,2样品制备
5.3,.2.1从做完净度后的种子中,随机取试样2-4份,每份100位,逐位粉碎后(粉碎粒度<!mm)
目‘t公确. 。二 ,t口11 -),V,、 i*r .._ trC闷,
5,3.2.2吸取。
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