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第10章 经典液相色谱法 1.定义：经典液相色谱法包括柱色谱和平面色谱，是在常压下靠重力或毛细作用输送流动相的色谱方法。 吸附色谱法 分配色谱法 离子交换色谱法 空间排阻色谱法 一、吸附色谱法 分离原理 利用被分离组分对固定相表面吸附中心吸附能力的差别而实现分离。 吸附过程是试样中组分的分子(X)与流动相分子(Y)争夺吸附剂表面活性中心的过程，即为竞争吸附过程 。 吸附色谱法 固定相 多为吸附剂，如硅胶、氧化铝。 硅胶表面硅醇基为吸附中心。 经典液相柱色谱和薄层色谱：一般硅胶 高效液相色谱：球型或无定型全多孔硅 胶和堆积硅珠。 气相色谱：高分子多孔微球等 吸附色谱法 流动相 有机溶剂（硅胶为吸附剂） 洗脱能力：主要由其极性决定。 强极性流动相占据吸附中心的能力强，洗脱能力强，使k值小，保留时间短。 Snyder溶剂强度?o：吸附自由能，表示洗脱能力。?o值越大，固定相对溶剂的吸附能力越强，即洗脱能力越强。 吸附色谱法 洗脱顺序 ka=KaSa/Vm 在色谱柱（Sa与Vm一定）时，Ka大的组分保留强，后被洗脱，Ka小的组分在吸附剂上保留弱，先被洗脱。 Ka与组分的性质（极性、取代基的类型和数目、构型有关）。 二、分配色谱法 分配色谱法 分离原理 利用被分离组分在固定相或流动相中的溶解度差别而实现分离。 分配色谱法 固定相 又称固定液（涂渍在惰性载体颗粒上的一薄层 液体；化学键合相（通过化学反应将各种有机 基团键合到载体上形成的固定相）。 流动相 气液分配色谱法：气体，常为氢气或氮气。 液液分配色谱法：与固定相不相溶的液体。 正相液液分配色谱：流动相的极性弱于固定相的极性。 反相液液分配色谱：流动相的极性强于固定相的极性。 分配色谱法 洗脱顺序 由组分在固定相或流动相中溶解 度的相对大小而决定。 载体： 对载体的要求：化学惰性；对组分的吸附力小，但能吸留较大量的固定相液体。载体必须纯净，颗粒大小。 常用载体：硅胶、硅藻土、纤维素。 三、离子交换色谱法 分离原理 利用被分离组分离子交换能力的 差别而实现分离。 分为阳离子交换色谱法和阴离子交换色谱法。 阳离子交换： 阴离子交换： 离子交换通式： 四、空间排阻色谱法 分离原理　根据被分离组分分子的线团尺寸 进行分离。 也称为分子排阻色谱法。 空间排阻色谱法 固定相　多孔凝胶：软质、半软质和硬质 主要性能参数 平均孔径 排斥极限（Kp=0）：不能渗透进入凝胶的任何孔隙最低分子量 分子量范围：排斥极限（Kp=0）与全渗透点（Kp=1）之间的分子量范围围。选择凝胶时应使试样的分子量落入此范围。 空间排阻色谱法 流动相 要求：能溶解试样、润湿凝胶，粘度要低 水溶性试样选择水溶液为流动相(称为凝胶过滤色谱gel filtration chromatography； GFC)； 非水溶性试样选择四氢呋喃、氯仿、甲苯和二甲基甲酰胺等有机溶剂为流动相 (凝胶渗透色谱gel permeation chromatography；GPC)。 空间排阻色谱法 保留体积与渗透系数的关系　　　　　 小结 色谱过程方程式： 分配系数大的组分保留时间长（保留体积大），晚流出色谱柱。 K在分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱和凝胶色谱中，分别为狭义分配系数K、吸附系数Ka、选择性系数KA/B和渗透系数Kp， Vs分别为色谱柱（或薄层板）内固定液体积、吸附剂表面积、离子交换剂总交换容量和凝胶孔内总容积。 一、概述 二、定性参数 三、薄层板的制备和薄层色谱的操作方法 四、定性与定量分析 一、概述 二、定性参数 1、 比移值Rf 2、 相对比移值Rs 三、薄层板的制备和薄层色谱的操作方法 纸色谱法（Paper Chromatography,PC） 定义：将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、进行定性和定量的液-液分配色谱法。 固定相：纸纤维吸附的水 流动相：与水不互溶的有机溶剂（如饱和正丁醇） 分离机制：液-液分配色谱 定性参数： 硅胶G——含粘和剂 硅胶H——不含粘和剂，铺板时另加入CMC-Na 硅胶GF254——含荧光剂，254nm紫外光照发绿光 薄层板的制备: 手工制板，预制板 操作方法：板的活化 点样：点样量 点样面积 展开：上行展开，展开槽预饱和 斑点定位：显色 荧光检测 荧光物质（普通硅胶板上显亮斑） 非荧光有紫