微生物工业的菌种jiang.pptxVIP

在微生物工业中，起决定作用的是微生物的菌种，要获得一个具有潜在工业应用价值的微生物菌种的第一步是必须从自然界中分离出这种微生物。;一、生产菌种的分离、筛选;（一）材料的选择;（二）材料的预处理; 用0.01N的NaOH处理样品，可分离得到小单孢菌。 用4ml/L的氨水处理后，再用2mg/L的氯处理样品，分离得到了游动放线菌。;（三）分离、筛选方案的设计; 在抗生素的筛选过程中，为避免致病菌的感染与扩散，一般不采用致病菌为试验的指示菌，尽可能选择非致病菌而又能代表致病菌的其它微生物作为试验的指示菌，这些试验指示菌就称为筛选模型。;小麦赤霉病菌 Fusarium graminearum ;加选择性压力 加入不同的抗生素或试剂来增加选择性，如分离真菌时，可加入抗细菌抗生素，分离放线菌和细菌时，可加入抗真菌抗生素。;富集培养 指能增加混合菌群中所需菌株的一种技术，方法是在混合菌群中提供有利于所需菌株生长或不利于其它微生物生长的条件。;诱饵法 在分离样品或培养基中加入一些特殊的营养物，待菌生长一定时间后，再进行分离。 如将涂石蜡的棒置于培养基中，可分离到诺卡氏菌。 以纤维素作为唯一碳源培养基可分离到分解纤维素的菌群。 ;反应特性 如分离蛋白酶，在不溶性蛋白的平板上可产生一清晰的透明圈，透明圈的大小可作为选择的依据。;随机分离 制备一系列培养基，其中各种类型的养分成为限制因子。 避免使用容易同化的碳、氮源，因为它们可能产生分解代谢物阻遏。;（四）菌种的培养和选择;大量选择 选择某一类（种或属）;菌种筛选时应考虑的一些重要指标 1、菌的营养特性 2、菌的生长温度 3、菌对生产设备和生产过程的适应性 4、菌种的稳定性 5、从发酵液中提取产物的情况 6、产物的收得率情况;(一)自然选育 (二)常规诱变育种 (三)合理诱变育种 (四)原生质体融合技术 (五)基因工程技术;(1)解除或绕过代谢途径中的限速步骤： （通过增加特定基因的拷贝数或增加相应基因的表达能力来提高限速酶的含量；在代谢途径中引伸出新的代谢步骤，由此提供一个旁路代谢途径）。 (2)增加前体物的浓度。 (3)改变代谢途径，减少无用副产品的生成以及提高菌种对高浓度的有潜在毒性的底物、前体或产品的耐受力。 (4)抑制或消除产品分解酶。 (5)改进菌种外泌产品的能力。 (6)消除代谢产品的反馈抑制。如诱导代谢产品的结构类似物抗性。 ; 从自然界直接分离得到的菌种，一般不会立即适合实际生产的需要，只有通过选育，才能提高产物的产量，改进品质，甚至简化工艺。;(一)自然选育;(二)常规诱变育种;常规诱变育种的一般操作过程;稀释平板分离;复筛 （以出发菌种为对照）;;;诱变育种应注意的几个问题 (1)出发菌株的选择 (2)复合诱变剂的使用 (3)诱变剂的剂量 (4)突变株的筛选 (5)高产突变株培养条件的优化;常用物理、化学诱变剂： (1)紫外线 (2)快中子 (3)高频电子流 (4)Co-60 (5)亚硝酸 (6)氮芥 (7)亚硝基胍;（三）合理诱变育种;酶合成的调节： 诱导：只有在有诱导物存在的时候，酶才能合成，这样的酶称为诱导酶。不需诱导物就能合成的酶是组成酶。诱导又分为协同诱导、顺序诱导等。 阻遏:是阻止酶的合成，又有反馈阻遏、分解代谢物阻遏等。;酶活性的调节： 对已经存在酶的活性进行调节，分为激活和抑制。 酶的激活有前体激活、补偿性激活等；酶的抑制有终点产物反馈抑制、协同反馈抑制、累积反馈抑制等。;(1)选育组成型菌株 (2)选育抗反馈调节的突变株 (3)选育营养缺陷型 (4)选育负变菌株的回复突变株 (5)选育条件抗性突变株 (6)选育细胞膜透性改变的突变株 (7)选育抗生素抗性突变株;(四)原生质体融合技术;;金色链霉菌，四环素发酵单位14000~17000?g/ml;阿克拉霉素产生菌(链霉菌);用原生质体技术提高发酵单位的例子;原生质体融合技术的优点： (1)去除细胞壁的障碍，亲株基因组直接融合、交换和实现重组，不需要有已知的遗传操作系统 (2)原生质体融合后，两亲株的基因组之间有机会发生多次交换，产生各种各样的基因组合而得到多种类型的重组子 (3)重组频率特别高 (4)可以和其它育种方法相结合 (5)可以用药物、温度、紫外线钝化亲株的一方，然后再进行融合，这样可以提高筛选的效率 (6)原生质体融合并不局限于种内，还可以进行种间和属间的原生质体融合;(五)基因工程技术;基 因 工 程 简 要 说 明;;第42页/共67页;;;1、基因工程生产蛋白质及多肽类药物; 人胰岛素由A、B二条链