人载脂蛋白AI表达上调剂的发现与活性研究.pdf

中国医药生物技术 2014 年 4 月第 9 卷第 2 期 Chin Med Biotechnol, April 2014, Vol. 9, No. 2 95 OI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2014.02.003 ·论著· 人载脂蛋白 A-I 表达上调剂的发现 与活性研究 杜郁，贾晓健，王丽，王丽非，姜华军，杨帆，司书毅，杨媛，洪斌 【摘要】 异质性，HDL 可分为多种亚型并表现有代谢和功 目的 筛选上调人载脂蛋白 A-I （ApoA-I ）基因表达的新型 能上的差异[1] 。2006 年和 2012 年，两个旨在升高 活性化合物，并在表达和功能水平对其作用进行研究。 血浆 HDL-C 水平的胆固醇酯转运蛋白（cholesteryl 方法 利用人 ApoA-I 基因表达上调剂筛选模型对化合物 ester transfer protein，CETP ）抑制剂 torcetrapib 和 [2-3] 库进行筛选；对发现的活性化合物在 ApoA-I 启动子水平 dalcetrapib （JTT-705 ）临床试验分别遭遇失败 ， 进行量效关系研究；利用实时荧光定量 RT-PCR 检测 引发了研究人员对 HDL 复杂性与心血管病收益 ApoA-I mRNA 的表达水平；利用 Western blot 、ELISA 和 的一系列争论，研究关注的焦点逐渐从升高 流式细胞技术检测 ApoA-I 的蛋白表达；利用胆固醇流出 HDL-C 的水平转向提升 HDL-C 的功能。 试验检测 ApoA-I 介导的巨噬细胞胆固醇外流的情况。 载脂蛋白 A-I （apolipoprotein A-I，ApoA-I ）约 结果 从 20 000 样次化合物筛选中得到活性化合物 占 HDL 蛋白组成的 70% ，因而血浆 ApoA-I 的 5238B-69，在一定浓度范围内存在转录调控活性的量-效关 浓度与 HDL-C 水平密切相关。同时，ApoA-I 作 系，当化合物浓度为 0.30 μg/ml 时，上调 ApoA-I 表达活 为 ATP 结合盒式转运子（ATP-binding cassette-A1 ， 性达到最高值（408% ），EC50 为 0.01 μg/ml 。5238B-69 能 ABCA1 ）的配体，能够介导巨噬细胞中游离胆固醇 的外流，从而起始 HDL 的生物合成，同时启动胆 显著上调 HepG2 细胞中 ApoA-I mRNA 的水平；同时， 固醇逆转运过程，在肝外组织清除过多胆固醇的过 Western blot 结果显示 5238B-69 能增加 HepG2 细胞 程中发挥了重要作用。动物体内的研究表明，过表 ApoA-I 蛋白的表达。ELISA 结果显示，与对照相比， 5238B-69 作用 48 h 时，胞外 ApoA-I 水平增加了 48% ， 达人 ApoA-I 基因能显著抑制小鼠体内动脉粥样 硬化早期损伤——脂纹的形成[4] ，更重要的是，在 流式细胞检测表明，5238B-69 作用 24 h 后，胞内 ApoA-I 蛋白水平增加了 21.4% 。功能分析试验显示，5238B-69 作 动脉粥样硬化易感小鼠中，过表达 ApoA-I 通过增 强巨噬细胞 RCT 增加了粪便中胆固醇的排出，这 用 HepG2 细胞上调生成的 ApoA-I ，能促进巨噬细胞 RAW