实验一-实验室环境和人体表面的微生物检查.docVIP

实验2 实验室环境和人体表面的微生物检查 13生物基地 刘洋 201300140059 实验目的 证实实验室环境与人体表面存在微生物 体会无菌操作的重要性 观察不同类群微生物的菌落形态特征 掌握生理生化反应培养基的配置原理和一般方法步骤 巩固无菌操作技术 实验器材 肉膏蛋白胨琼脂平板 牛肉膏 1.05g、蛋白胨 3.5g、NaCl 1.75g、琼脂 7g、水 350ml、pH 7.0~7.2、121 ℃灭菌20min。 溶液和试剂 无菌水 仪器和其他用品 灭菌棉签（装在试管内）、试管架、煤气灯或酒精灯、记号笔和废物缸等。 实验原理 通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上，经过生长繁殖形成几百万个菌聚集在一起的肉眼可见的菌落。 实验内容及步骤 在标签纸上做好标记并贴在培养皿侧面。 牛肉膏蛋白胨培养基的制备： 称量：准确称取牛肉膏 1.05g、蛋白胨 3.5g、NaCl 1.75g放入烧杯中。 熔化：在上述烧杯中加入少于所需的水量（所需水量为350ml），用玻璃棒搅匀，补充水到所需的总体积350ml。 调pH：用1mol/L NaOH和1mol/L HCl进行调节，直至溶液pH达到7.0~7.2。 分装：将其中200ml溶液装入500ml三角瓶中，向三角瓶中加入4.0克琼脂，向烧杯剩余液体中加入3.0克琼脂，在石棉网上加热烧杯，使琼脂溶解，将烧杯中溶液分装到10支试管中，每支试管中加入体积为试管总体积的1/5左右。 加塞：在三角瓶口上塞上棉塞，防止外界微生物进入造成污染。 包扎：加塞后，在棉塞外包一层牛皮纸，将全部试管用麻绳捆好（还有一支装有无菌水的试管），同样的方法把三角瓶包好，扎好。用记号笔注明培养及名称、组别、配制日期。 灭菌：将上述培养基以0.1MPa，121℃，90min高压蒸汽灭菌。 搁置斜面：将灭菌的试管培养基冷却至50℃左右，将 试管口端搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管的总长的一般为宜。 倒平板： 点燃酒精灯，右手握住三角瓶底部，用左手小指将棉塞夹住，拔出，随之将瓶口边缘在火焰上过一下，杀死粘在瓶口外的杂菌。左手拿起一套平皿，用无名指和小指托住平皿底部，用中指和大拇指夹住皿盖并开启一缝，恰好能让三角瓶伸入，随后倒出培养基。倒入15~20ml培养基，铺满整个皿底。盖上皿盖，置水平位置待凝。重复上述操作，直至倒够所需数量。 微生物的接种： 在火焰旁，半开皿盖，从试管中取出灭菌湿棉签，在手心上擦拭约2cm2的范围，然后将棉签从平板的开启处伸进平板表面，在培养基上涂抹，闭合皿盖，放回棉签。 在火焰旁，半开皿盖，从试管中取出灭菌湿棉签，在实验台面擦拭约2cm2的范围，然后将棉签从平板的开启处伸进平板表面，在培养基上涂抹，闭合皿盖，放回棉签。 取六个培养皿，在实验室打开皿盖，三个暴露5min，三个暴露10min，之后盖好皿盖，并做好标记。 取棉签在头发上擦拭2cm2的范围，然后将棉签从平板的开启处伸进平板表面，在培养基上涂抹，闭合皿盖，放回棉签。 培养： 将所有的琼脂平板翻转，使皿底朝上，从接触空气的两组共六个培养皿中各取出一个置27℃，其余所有置37℃，培养一星期。 观察 观察菌落的形态，区分细菌与霉菌 对单个细菌的菌落进行描述，应该对菌落的大小（大、中，小），颜色（白，黄，粉红等），干湿（干、湿），边缘（整齐，不整齐），表面（光滑，粗糙，有无突起等）分别进行阐述并详细记录。 在不同的培养条件下对菌落的数量及种类进行比较,并找出不同培养条件下的相似菌，并对相似菌进行描述。 划线分离与菌种的纯化 32从第六步观察到的菌落中挑选两个进行划线分离操作。如图所示，先在平皿上划定区域，然后将接种针在火焰上进行灭菌操作，取含菌种的培养皿，在火焰上方（注意：不能离火焰太近）打开培养皿盖，先拿接种针在上盖处划线以降温，然后用接种针轻挑所选菌落一到两下，将平皿盖上放好，再取刚刚冷却了的干净平皿在1区进行划线接种操作。操作完毕后对接种针进行灭菌操作，完成后在火焰上方打开平皿盖，将接种针冷却后从1区引线到2区，再如图所示划线，划完后引线到3区，同上进行划线，划线完毕后盖盖平放，贴好标签后在37℃条件下培养。同以上方法对另一菌落进行接种与培养操作。 3 2 实验结果 表一：细菌的描述 菌种 特征 数量 发现人 大小 颜色 边缘 表面 形态 干湿 3-2-空气-10’-37℃ 小 橘红 不整齐 微凸、粗糙 不规则 湿润 1 刘洋 3-2-空气-5’-37℃ 小 金黄 整齐 光滑 圆形 湿润 5 刘沛余 3-2-空气-5’-37℃ 小 乳白 整齐 扁平 圆形 湿润 1 吕赞 3-2-空气-5’-37℃ 小 黄色、边缘略白 凹凸不平 微凸 不规则 湿润 1 马华峥 3-2-手-37℃ 小 淡黄 锯齿状 四周