高效液相色谱和应用培训.pptx

液相色谱应用知识培训 ;;;;;1.4应用领域和局限性;2.1色谱参数;色谱图术语 色谱图(chromatogram)——样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elution profile)。 基线(base line)——经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。 噪音(noise)——基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。 漂移(drift)——基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。 色谱峰(peak)——组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。流出曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。; 峰底—基线上峰的起点至终点的距离 峰高(h)—峰的最高点至峰底的距离 峰宽（W)—峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离 半峰宽（Wh/2)—峰高一半处的峰宽峰面积(A)—峰与峰底所包围的面积 保留时间(tR)—从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间 死时间（t0）—不保留物质的出峰时间;b.分配系数K;d.选择性系数α;2.2 塔板理论;2.3速率理论-Van Deemter方程;获得高柱效的几种方法小结： a.选用小粒径的颗粒填料，更为均匀的填料 b.适当的流动相的流速 ...;R: 分离度 tR: 保留时间 t0：死时间 W：峰底宽度;分离度R反映的是相邻两个峰的分开程度 R太小，两个峰无法彻底分离 R太大，分离时间过长，工作效率低下 一般要求R1.5，也可遵循行业特殊规定;从数学推导来看，分别增大n，α，k值，都可以提高分离度R! ; 改变容量因子的方法有： 改变柱温 改变柱死体积， 改变流动相的配比,最简便最有效的方法 梯度洗脱 ; ;紫外检测器;二元高压和四元低压区别; 二元高压的混合比例是通过改变泵的流速来获得的，通常泵的流速都是很准的，所以混合的精度也是很高的。 四元低压梯度的混合比例是通过控制不同流路的电磁阀的开闭时间长短来控制的，理论上混合的比例也是准确的，但是实际上电磁阀的开闭会有一个延迟，无论它动作多么快，总还是需要一点时间的 一般地，对于常规分析来说，四元低压梯度也可以满足需要;如果分析样品成份复杂、对重现性要求较高，或者需要在低流量下进行梯度分析，还是选择高压梯度好一些。; a. 紫外光度检测器（UV） b. 光电二极管阵列检测器（PAD/DAD） c. 荧光检测器（FD） d. 示差折光检测器（IR） e. 蒸发光散射检测器（ELSD） f. 质谱检测器（MS）;原理：基于被分析的试样组分对特定波长的紫外线的选择性吸收，组分浓度与吸光度的关系遵守比尔定律。 应用：液相中最常用的检测器，可以满足90%以上的分析需求， 原则上来说只要对紫外光有吸收的物质都可以用紫外检测器来检测，具有灵敏度高，稳定时间相对较短的特点 很多溶剂在一定的波长下都会有紫外吸收，所以要避免使用他们有紫外吸收的波长进行检测。每种溶剂出现紫外吸收的那个波长叫做 截止波长 ;手动进样器(六通阀)： ;;;;高效液相色谱的组成 – 色谱工作站; 专门的纯水机或超纯水机； 去离子水重蒸； 二次或三次重蒸水； 采用类似家用的纯水机； 市场上瓶装的纯净水或蒸馏水； 其它途径； ;4.3 流动相的配制（过滤、过渡）; ;;溶 剂;溶剂;4.4使用进样阀的注意事项 ; 使用流动相尽量要清洁； 进液处的砂芯过滤头要经常清洗； 流动相交换时要防止沉淀； 避免泵内堵塞或有气泡； ; 4.7 色谱柱的保养 柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动； 当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净； 要注意流动相的脱气； 避免使用高粘度的溶剂作为流动相； 进样样品要提纯； 严格控制进样量； 每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品； 每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱； 若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭;5.应用实例;对照品;仪器;5ug/ml样品图;金锣王中王火腿肠样品