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知识目标： 理解菌落总数的测定意义。 了解菌落总数与细菌总数的区别。 掌握动物性食品菌落总数测定方法。 专业教学资源库 动物检疫检验技术 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 动物性食品菌落总数测定 动物性食品菌落总数测定 主讲人：王福红 动物性食品微生物检验 能力目标： 会进行食品检样的稀释、接种、培养基制备及倾注。 会进行菌落计数并正确报告结果。 一、菌落总数（CFU) 菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后,所得1mL(g)或1cm2面积检样中形成的微生物菌落总数。 细菌总数是指一定数量或面积的食品检样经过处理，在显微镜下对细菌进行直接计数。其中包括各种活菌数和尚未消失的死菌数，也称细菌直接显微镜数。 二、菌落总数测定的意义 1.判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。 2.预测食品存放期限的长短。 3.了解细菌在食品中的繁殖动态。 三、菌落总数测定的方法 ※ 平板倾注法＃ 平板表面涂布法 平板表面点滴法 检验方法：GB4789.2-2010 液体样品 固体与半固体样品 倾注培养基 培养 接种平皿 均质与 稀释处理 菌落计数 四、检验程序 稀释 五、操作步骤 固体和半固体样品 称取25g样品放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10 的样品匀液。 液体样品 以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。 吸取1 : 10的稀释液1ml注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀制成1 ：100稀释液 按同法依次稀释成1: 1000 , 1: 10000稀释液等备用 根据对样品污染情况的估计，选择3个适宜稀释度,分别作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿中 每递增稀释一次，必须更换一支1mL灭菌吸管 每个稀释度制作2个平皿 同时做空白试验 倾注平板计数琼脂培养基 温度：46℃左右 用量：15mL～20mL 培养 温度：36士1℃ 时间：48士2h 稀释液与培养基混匀凝固后 48小时后 平皿菌落生长情况 同一稀释度两个平皿 一个样品所有平皿 平皿菌落 平皿菌落生长情况 同一稀释度两个平皿 一个样品所有平皿 平皿菌落 同一稀释度两个平皿 一个样品所有平皿 平皿菌落 平皿菌落生长情况 六、菌落计数及报告方法 记下各平板的菌落数后，求出同一稀释度两个平板的平均菌落数 选择平均菌落数在30～300之间者进行计算 不同稀释度的选择及报告方法 只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告（见表中实例1） 实例 不同稀释液的平均菌落数 菌落总数 （CFU/mL） 报告方式 （CFU/mL） 10-1 10-2 10-3 1 多不可计 164 20 16 400 16 000／1.6×104 不同稀释度的选择及报告方法 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则按下列公式计算 （见表中实例2、3） 式中：N—样品中菌落数 C—平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和； n1—第一稀释度（低稀释倍数）平板个数； n2—第二稀释度（高稀释倍数）平板个数； d—稀释因子（第一稀释度）。 不同稀释度的选择及报告方法 只若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中实例4） 实例 不同稀释液的平均菌落数 菌落总数 （CFU/mL） 报告方式 （CFU/mL） 10-1 10-2 10-3 4 多不可计 多不可计 513 513000 510 000 不同稀释度的选择及报告方法 只有若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中实例5） 实例 不同稀释液的平均菌落数 菌落总数 （CFU/mL） 报告方式 （CFU/mL） 10-1 10-2 10-3 5 27 11 5 270 270 不同稀释度的选择及报告方法 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则应以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中实例6） 实例 不同稀释液的平均菌落数 菌落总数 （CFU/mL） 报告方式 （CFU/mL） 10-1 10-2 10-3 6 多不可计 305 12 30500 31 000 不同稀释度的选择及报告方法 若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以小于