骨代谢异常生物化学检验方法.ppt

* * * * * * * * * * * * （二）1,25- (OH)2-D3的测定 放射竞争性结合法（CPB） 放射受体测定法（RRA） 放射免疫法（RIA） 高效液相色谱法（HPLC） 由于1,25- (OH)2-D3是血清中维生素D的主要活性形式,故是反映维生素D状况的最佳指标。 （三）血清降钙素测定 RIA：不同来源抗血清灵敏度和特异性不同，不同方法和试剂盒间差异较大，使临床正常水平在实验室之间难以统一。 两点免疫法（EIA和IRMA）：测出正常人降钙素的基础水平低于10 ng/L～20ng/L，其检出限可小于2ng/L。 两点法在诊断甲状腺髓样癌（medullary thyroid carcinoma MIC）要比大多数竞争性RIA显现出良好的灵敏度和特异性。 三、骨转换相关标志物检测 1.骨钙素测定 放射免疫法（ RIA法） 酶联免疫法（ ELISA法） 亲和素-生物素酶免疫测定法(BAEIA) 化学发光免疫分析法(CLIA) 免疫荧光分析法(FIA)等 目前应用最多的是RIA法和ELISA法 （一）骨形成标志物的检测 2.骨性碱性磷酸酶测定 （1）化学法：先识别或分离出BALP，再测定其碱性磷酸酶的活性。 （2）免疫放射法(IRMA)测定BALP：IRMA法定量检测骨ALP可作为筛选试验，高值标本须用电泳法证实除去肝ALP干扰，检测骨ALP过低标本时，以电泳法为首选。 （3）化学发光免疫分析法：具有高度的特异性和敏感性，而且操作简便，被认为是目前鉴别和定量分析BALP的最佳方法。 3. I型前胶原肽 I 型前胶原羧基端前肽 （PICP） I 型前胶原氨基端前肽 （PINP） 检测方法： 放射免疫法（ RIA法） 酶联免疫法（ ELISA法） 制备抗PINPα1链的抗体建立的免疫标记法是测定PINP的主要方法。 1.吡啶酚（PYD）和脱氧吡啶酚（DPD） 测定方法： HPLC法：用HPLC-荧光检测法测定。 ELISA法：用竞争性单克隆抗体测定脱氧吡啶酚。 RIA 法 ：用用同位素标记抗体检测吡啶酚。 （二）骨吸收标志物检测 2.I 型胶原C端肽和N端肽测定 测定方法： HPLC法：用HPLC-荧光检测法测定。 ELISA法：用竞争性单克隆抗体测定Ⅰ型胶原交联区的C端和N端肽是目前主要采用的方法。 RIA 法 ：用同位素标记抗体检测吡啶酚。 3.耐酒石酸酸性磷酸酶 检测方法 酶动力学法 电泳法 放射免疫法 酶联免疫法 4.尿羟脯氨酸检测（HOP） 测定方法： （1） 化学试剂法：尿总HOP测定采用酸性环境中将胶原肽链上的HOP水解下来，再氧化生成吡咯，用Ehrlich试剂（酸性对二甲氨基苯甲醛试剂）显色。 （2）离子交换色谱反向HPLC法。 第五节 骨代谢异常检测的临床应用 代谢性骨病是一种伴有钙、磷、镁、维生素D代谢和甲状旁腺功能异常的全身骨骼病。 临床上以骨重建紊乱所致的骨转换率异常、骨痛、骨畸形和骨折为主要特征。 常见疾病是骨质疏松症和骨软化症和佝偻病。 骨质疏松症（osteoporosis）是以骨组织显微结构退化为特征，骨矿成分和骨基质等比例地不断减少，骨质变薄，骨小梁数量减少，骨脆性增加和骨折危险度升高的一种全身骨代谢障碍的疾病。 常见原因： 1. 生长期骨形成缺陷。 2. 成骨细胞骨形成受损。 3. 增加骨吸收的其他病理生理过程。 一、骨质疏松症 年龄、 种族（白色人种>黑色人种>黄色人种） 长期低钙饮食 PTH增加 绝经或卵巢切除 长期卧床 营养缺乏 糖尿病 肾功能不全性别 胃肠切除 脂肪泻 类风湿 慢性肝炎 骨质疏松症的危险因素 雌激素 （Estrogen） 甲状旁腺激素 （parathyroid hormone , PTH） 降钙素 （Calcitionin , CT） 活性维生素D （1-25（OH）2D3) 甲状腺素 ( Thyroxine ) 雄激素 ( Androgenic hormone ) 皮质类固醇激素 (Corticosteroid hormone) 生长激素 (Growth hormone , GH) 与骨质疏松症有关的激素 原发性骨质疏松症 （primary osteoporosis）占90% 停经后骨质疏松症（I型） 老年性骨质疏松症（II型） 继发性骨质疏松症 （secondary osteoporosis）占10% 分型