logo

您所在位置网站首页 > 海量文档  > 教学课件 > 大学课件

CpGODN的免疫刺激作用.ppt 33页

本文档一共被下载: ,您可全文免费在线阅读后下载本文档。

  • 支付并下载
  • 收藏该文档
  • 百度一下本文档
  • 修改文档简介
全屏预览

下载提示

1.本站不保证该用户上传的文档完整性,不预览、不比对内容而直接下载产生的反悔问题本站不予受理。
2.该文档所得收入(下载+内容+预览三)归上传者、原创者。
3.登录后可充值,立即自动返金币,充值渠道很便利
CpG-ODN的免疫刺激作用 陈军浩 南京大学医学院附属鼓楼医院 CPG概念 为非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸重复序列,即CpG 基序。 一种免疫佐剂 作用靶点TLR9 细胞免疫,体液免疫 Th1免疫应答 慢性乙型肝炎患者细胞免疫低下 HBV免疫耐受,持续感染 肿瘤微小残留病的清除 CPG提高PBMC中Th1细胞 CPG提高PBMC中Th1 、Tc1细胞百分率 CPG刺激BPMC分泌细胞因子 CPG诱导PBMC杀伤靶细胞 收集CPG活化的PBMC 细胞毒性实验:效应细胞为CPG活化的PBMC;靶细胞为CFSE预染的K562细胞。对照组效应细胞为未经CPG活化的PBMC。 效:靶=20:1,混合培养2h。流式细胞术检测靶细胞死亡率。 CPG诱导PBMC杀伤靶细胞 CFSE染色靶细胞 浓度为5μmol/ L 的CFSE (2羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯)工作液 取对数生长期的靶细胞浓度108/ L 细胞悬液与等体积CFSE 工作液混合 37 ℃孵育10 min。 离心洗涤两次后 悬浮细胞备用 CFSE染色靶细胞 实验结果 CpG活化PBMC对K562细胞的杀伤作用(N=5) CPG活化PBMC   16.85±5.14 %   对照组    8.62±2.83 % CIK细胞杀伤靶细胞 CIK细胞杀伤靶细胞 研究背景 通过主动免疫、过继特异性免疫、过继非特异性免疫等方式,清除慢性乙肝患者体内残存的HBV,达到治疗效果。 研究背景 B淋巴细胞具有抗原递呈细胞的性质,同时具有CpG-ODN受体:TLR-9。本研究探讨CpG-ODN诱导B淋巴细胞成为高效APC,使之具有类似于树突状细胞功能的可行性。 TOLL受体 TOLL受体在血细胞中的表达 活化B细胞负载核心抗原 磁珠分选B淋巴细胞 CPG活化B淋巴细胞 核心抗原肽:FLPSDFFPSV-FITC 流式细胞仪、荧光显微镜检测抗原负载状况 磁珠分选B细胞 活化B细胞负载抗原肽 活化B细胞负载核心抗原 APC与T细胞作用机制 CPG对B细胞抗原递呈相关分子的作用研究 CpG2006、2216由上海生物工程技术服务有限公司合成,全硫代化修饰 对照组为含10%FCS的RPMI1640+外周血PBMC,细胞量107/孔,37℃、5%CO2、48小时 实验组加入CpG2006或CpG2216,终浓度均为1umol/mL,余同上 CpG提高淋巴细胞CD69表达 B细胞CD80、CD86表达 CpG提高B细胞表面CD80、CD86的表达 B细胞MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ表达 CpG提高B细胞表面MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表达 活化B细胞诱导CTL 负载了抗原的活化B细胞与淋巴细胞混合培养(含IL-2的RPMI1640培养液). 收集细胞,以五聚体技术检测HBV特异性CTL. 实验组特异性CTL为0.50±0.19%,对照组为0.20±0.10%。 特异性CTL诱导 结论 CpG能够活化B细胞,对T细胞无明显的作用 CpG能够提高B细胞表面抗原递呈相关分子的表达 CPG诱导PBMC产生高水平的IFN-γ CPG诱导淋巴细胞向Th1、Tc1分化 CPG增强PBMC对K562细胞的杀伤作用 通过B细胞介导, CPG可诱导特异性CTL Pro5TM MHC Pentamers检测对照组和实验组HBcAg18-27抗原特异性CTL(Q2-1区)。前者为对照组(未加APC),后者为实验组(加APC)。 * * Th1占淋巴细胞百分比 * * *:与对照组比较,P<0.05 * *:与对照组比较,P<0.05 * *:与对照组比较,P<0.05 分选前B细胞 7.89% 分选后B细胞 89.6% 荧光显微镜观察B细胞负载HBcAg18-27肽 T淋巴细胞 B淋巴细胞 CD69表达率(%) * * *:与对照组比较,P<0.05 对照组 加CPG-ODN组 加CPG-ODN组 CD80    CD86 CD80、CD86表达率(%) * * * * *:与对照组比较,P<0.05 对照组 加CPG-ODN组 MHC-Ⅰ        MHC-Ⅱ MHC表达量(MFI) * * * * *:与对照组比较,P<0.05

发表评论

请自觉遵守互联网相关的政策法规,严禁发布色情、暴力、反动的言论。
用户名: 验证码: 点击我更换图片

“原创力文档”前称为“文档投稿赚钱网”,本站为“文档C2C交易模式”,即用户上传的文档直接卖给(下载)用户,本站只是中间服务平台,本站所有文档下载所得的收益归上传人(含作者)所有【成交的100%(原创)】。原创力文档是网络服务平台方,若您的权利被侵害,侵权客服QQ:3005833200 电话:19940600175 欢迎举报,上传者QQ群:784321556