小反刍兽疫活疫苗（Clone9.PDFVIP

小反刍兽疫活疫苗（Clone 9 株） 本品系用小反刍兽疫弱毒Clone9 株接种Vero 细胞，收获细胞培养物，加适宜稳定剂经 冷冻真空干燥制成。用于预防羊的小反刍兽疫。 【性状】 乳白色或淡黄色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。 【无菌检验】 按现行《中国兽药典》附录3306 进行检验，应无菌生长。 【支原体检验】 按现行《中国兽药典》附录3308 进行检验，应无支原体生长。 【鉴别检验】 按瓶签注明头份将疫苗用无血清MEM 细胞培养液稀释成2 头份/ml，加 入等体积小反刍兽疫阳性血清，病毒对照管加入等体积无血清MEM 细胞培养液，在37℃下 作用1 小时后接种96 孔细胞培养板，病毒中和液和病毒对照液各接种5 孔，每孔0.1ml， 同时设立不接毒细胞对照5 孔，所有孔均加入浓度为20～30 万/ml Vero 细胞悬液0.1ml， 置37℃、5%CO 培养箱培养6 日，期间每日观察细胞病变，病毒对照孔均应出现细胞融合等 2 典型细胞病变，中和组及不接毒细胞对照孔均不得出现细胞病变。 【外源病毒检验】 按附录3305 进行检验，应无外源病毒污染。 【病毒含量测定】 按瓶签注明头份用无血清MEM 细胞培养液稀释成1 头份/ml，再作 -2 -3 -4 -5 10 倍系列稀释，取10 、10 、10 、10 四个稀释度，接种96 孔细胞培养板，每个稀释度 接种5 孔，每孔0.1ml，每孔再加入浓度为20～30 万/ml 的Vero 细胞悬液0.1ml，同时设 立正常细胞对照，37℃、5%CO 培养箱培养6 日，期间每日观察细胞病变，根据出现细胞病 2 3.0 变的孔数，按 Reed-Muench 法计算TCID ，每头份的病毒含量应不低于10 TCID 。 50 50 【安全检验】 （1）用豚鼠检验 将疫苗按瓶签注明头份用无菌生理盐水稀释成含 100 头份/ml，选取体重为200～250g 豚鼠6 只，肌肉注射2 只，每只0.5ml；腹腔注射2 只，每只0.5ml；2 只不接种，作为对照。逐日观察14 日，所有动物均应健活。 （2）用小鼠检验 将疫苗按瓶签注明头份用无菌生理盐水稀释成含100 头份/ml，用 体重为18～22g 小白鼠10 只，其中腹腔注射6 只，每只0.lml；4 只不接种，作为对照。逐 日观察14 日，所有动物均应健活。 （3）用山羊检验 将疫苗按瓶签注明头份用无菌生理盐水稀释成含100 头份/ml，颈 部皮下接种1岁龄左右健康易感山羊(小反刍兽疫病毒中和抗体效价小于1:4)3 只，每只1ml。 接种后每日测定体温1 次并观察临床症状，连续观察14 日，除一过性体温升高外(持续不超 过2 个温次)，应无其它异常临床症状。 【效力检验】 将疫苗用灭菌生理盐水稀释成含1/10 头份/ml，颈部皮下接种1 岁龄左 右健康易感山羊(小反刍兽疫病毒中和抗体效价小于1:4)5 只，每只1ml，接种后21 日采血 测定中和抗体(附注1)，。免疫羊血清和阳性对照血清先作1:5 稀释，再进行2 倍系列稀释， 阴性血清作1:2、1:4、1:8 稀释，将各稀释度血清加入96 孔细胞培养板，每个稀释度接种 5 孔，每孔0.1ml，同时设立病毒回归对照，向所有血清孔加入100TCID /0.1ml 病毒工作液 50 0.1ml，向细胞对照孔加入0.2ml 无血清MEM 细胞培养液，向病毒对照孔中加入0.1ml 无血 清MEM 细胞培养液，37℃作用1 小时。加入浓度为20～30 万/ml 的Vero 细胞悬液0.1ml， 置37℃、5%C0 培养箱培养6 日，期间每日观察细胞病变。10TCID 以上病毒对照及阴性血 2 50 清对照孔均应出现小反刍兽疫病毒特有的细胞融合等细胞病变