《药物分析学》第17章生物药物分析概论.ppt

3. HPLC法 具有温和的分析条件与良好的生物兼容性，有利于保持生物大分子的构象和生理活性，广泛用于生化药物的含量测定。 （1）反相高效液相色谱法 （2）离子交换色谱法 （3）分子排阻色潽法 酶能专一、高效地催化某化学反 应，通过测定酶反应速度或生成物浓 度而检测供试品含量。 （二）酶分析法 1. 酶活力测定法 以酶为分析对象。 酶活力： 指酶催化化学反应的能力，即测 定被酶催化的化学反应的速率。 单位时间内底物减少或产物增加 酶活力单位： 酶在25oC下，以最合适的底物浓度、缓冲液离子强度和pH条件下，每分钟能转化1?mol底物的酶量为一个活性单位。 比活性： 2. 酶法分析 以酶为分析试剂或工具。 （三）生物检定法 生物检定法是利用生物体包括整体动物、离体组织、器官、细胞和微生物评价药物生物活性的一种方法。它以药物的药理作用为基础，以生物统计为工具，运用特定的实验设计在一定条件下比较供试品和相应的标准品或对照品所产生的特定反应，通过等反应剂量间比例的运算或限值剂量引起的生物反应程度，从而测定供试品的效价、生物活性或杂质引起的毒性。 第三节 生物制品分析 生物制品：以微生物、细胞及各种动物和人源组织和体液等为原料，运用传统技术或现代生物技术制成，用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品。收载于 ChP2015三部。 一、生物制品的种类 （一）疫苗类药物 细菌类疫苗（如狂犬病疫苗）、 病毒类疫苗（如乙肝疫苗）、联合疫 苗（如百白破疫苗）、双价及多价疫 苗（双价肾综合征出血热灭活疫苗）。 （二）抗毒素及抗血清类药物 凡用细菌类毒素或毒素免疫马或其他大动 物所取得的免疫血清叫抗毒素或抗血清。如 破伤风抗毒素等。 凡用细菌或病毒本身免疫马或其他大动物所取得的免疫血清叫抗菌或抗病毒血清，如抗蝮蛇毒血清等。 这类药物中含有大量抗体，注入体内不 需自身制造抗体就可以获得免疫力。只能作 为应急措施，排泄时间快，预防时间短。 （三）血液制品 由健康人血浆或经特异免疫的人血 浆，经分离、提纯或由DNA重组技术制 成的血浆蛋白组分，以及血液细胞有形 成分统称为血液制品。如人血白蛋白、人 凝血因子等。 （四）重组DNA制品 采用遗传修饰，将所需制品的编码 DNA通过一种质粒或病毒载体，引入适 宜的微生物或细胞系，DNA经过表达和 翻译后成为蛋白质，再进行提取和纯化 而回收所需制品制得。如重组人表皮生 长因子。 （五）微生态活菌制品 如双歧杆菌乳杆菌三联活菌片 （六）诊断制品 如乙肝病毒表面抗原诊断试剂盒 二、生物制品质量控制的特点 生物制品质量控制的特点是是针对生产全过程的质量控制。 生物制品的质量需要从原材料、生产过程到最终产品进行全过程控制，对原液、半成品和成品进行微生物学、化学和物理学检定。 原液（bulk）是指用于制造最终配制物或半成品的均一物质，由一次或多次单次收获物而得到，一般需要纯化并可能配制一批或多批半成品。 原材料的质量控制包括疫苗菌种库或细胞库、种子批系统、生产用培养基、外源因子和原料血浆。 生产过程的控制包括生产培养物的检定和原液检定，原液检定项目主要有细菌/细胞纯度检查、安全性检查和浓度测定。 半成品检定包括稳定剂检测、无菌试验、活性或病毒含量。 最终产品的质量控制要根据纯化工艺过程，产品理化性质、生物学性质、用途等来确定质量控制项目，一般要从物理化学性质、生物学活性(比活性)、纯度、杂质检测、安全试验方面进行检定。 三、物理化学检定 1. 鉴别 理化方法（HPLC、UV） 生物学方法：免疫印迹法、免疫斑点法、免疫双扩散法、酶联免疫法 2. 物理性状检查 3. 相对分子量的测定 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 4. 蛋白质纯度分析 HPLC法、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 5. 等电点 等电聚焦电泳，毛细管电泳（反映生产 工艺的稳定性 ） 6. 氨基酸序列分析 Edman化学降解法（重组蛋白质和多肽 重要的鉴别方法） 组成蛋白质的基本单位是氨基酸，氨基酸通过脱水缩合形成肽链，蛋白质是一条或多条多肽链组成的生物大分子。不同品种应针对自身蛋白质特性选择适宜的测定方法并做相应方法学验证，同时应尽可能选用与待测定品种蛋白质结构相同或相近的蛋白质作对照品。 7. 蛋白质含量测定法 ChP2015通则073