蛋白质酪胺酸磷酸化在阿拉伯芥植物根部发育之角色.docx

PAGE 4 PAGE 4 PAGE 4 中文摘要 中文摘要 生物体常藉由磷酸化或去磷酸化蛋白质分子调控其活性，进而影响细胞生理反应。这些磷酸化或去磷酸化生化反应需藉由蛋白质激 （protein kinases）或蛋白质去磷酸 （protein phosphatases）进行催化。蛋白质上可以被磷酸化与去磷酸化的胺基酸主要为丝胺酸（serine）、酥胺酸（threonine）、酪胺酸（tyrosine）。其中，蛋白质酪胺酸磷酸化（protein tyrosine phosphorylation）已在动物中证实可以经由讯息传递系统调控细胞生长发育与分化；然而，在植物的发育过程所扮演的角色却不清楚。 本研究藉由培养阿拉伯芥(Arabidopsis thaliana)下胚轴（hypocotyls）培养在 CIM 培养基(callus-inducing medium)诱导中柱细胞（stele）去分化形成愈伤组织 （callus），并进一步移至 BM (B5 medium)诱导不定根的发育。我们以抗体侦测酪胺酸磷酸化蛋白质在植物根部器官分化时的表现；我们亦利用温度敏感突变株 srd2 (在 22℃可被诱导成愈伤组织，在 28℃则否)欲证明酪胺酸磷酸化蛋白质的改变并非因为外加荷尔蒙的刺激。接着，再利用各种外加蛋白质激 抑制剂及去磷酸 抑制剂了解蛋白质磷酸化（主要为蛋白质酪胺酸磷酸化）是否调控植物发育。 结果显示，酪胺酸磷酸化蛋白质会在阿拉伯芥下胚轴诱导愈伤组织时大量表现；而且，培养在 CIM 培养基的 srd2 突变株在 22℃时有大量的酪胺酸磷酸化蛋白质，28℃则否。将野生型与 srd2 突变株之下胚轴培养于 CIM 培养基一天时，皆有酪胺酸磷酸化蛋白质表现量上升；但由野生型之下胚轴培养于 BM 及 CIM 培养基中一天，亦可见酪胺酸磷酸化蛋白质表现量上升，故推论培养早期所造成的酪胺酸磷酸化蛋白质表现量上升可能为植株受伤所诱导，而非愈伤组织发育所必需。在抑制剂的处理实验结果，我们发现蛋白质去磷酸 抑制剂 OA、 中文摘要 cantharidin、sodium orthovanadate 和 PAO 可抑制愈伤组织的形成，而且 sodium orthovanadate 亦会抑制酪胺酸磷酸化蛋白质的表现量；在不定根的分化过程中发现愈伤组织生成所必需的酪胺酸磷酸化蛋白质表现会随着时间减少，且不定根的 分化可被 OA、cantharidin 及 sodium orthovanadate 抑制。而 staurosporine 和 NH4-molybdate 则部分抑制。综合本研究结果，我们推论酪胺酸磷酸化蛋白质可能参与根部发育过程。  英文摘要 英文摘要 Protein phosphorylation and dephosphorylation are involved in the regulation of many eukaryotic intracellular processes. Protein tyrosine phosphorylation catalyzed by protein tyrosine kinase is important in the control of fundamental cellular activities. In animal system, protein tyrosine phosphorylation and dephosphorylation play a central role in a variety of signal transduction pathway regulating cell growth, development and differentiation. Though there were increasing evidences to the importance of reversible protein phosphorylation in cell responses to external stimuli in plants, data rel