猕猴桃抗病抗逆新品种选育及传统产业改造升级技术集成研究科技报告.docVIP

PAGE 9 目　　录 引言 1 1猕猴桃抗病抗逆新品种选育 2 1.1技术背景 2 1.2抗病抗逆新品种选育过程 2 1.3新品种分子鉴定 4 1.4主要性状分析 4 2传统猕猴桃基地改造升级研究 6 2.1 土肥水管理 6 2.2搭架改造 7 2.3整形修剪 7 2.4花果管理 8 2.5雌雄互接 9 2.6 采收 9 3结论 10 参考文献 11 图　表　清　单 图1 “XXX”号等5个品种的相似系数比较 4 图2 “XXX”号猕猴桃果实外观及横切面图 5 图3传统猕猴桃基地改造前图片 10 图4传统猕猴桃基地改造后图片 10 表1XXX号和XXX号果实特性比较 6 表2不同温度条件下XXX号果实好果率比较 6 引　　言 猕猴桃又名“奇异果”、“长寿果”、“美容果”，属呼吸（高峰）跃变型浆果类木质藤本植物。因其在世界上消费量最大的前26种水果中营养最为丰富全面，而享有“水果之王”、“世界珍果”之美誉，是世界各国尤其是发达国家竞相发展的新型保健果品。近20年来，XX县猕猴桃产业得以快速发展，栽培面积11万亩、总产量11万吨、总产值3.1亿元，现已成为继柑橘、烟叶之后的第三大农业支柱产业。长期以来，猕猴桃种植户生产管理仅凭传统经验，猕猴桃生产管理差，产量低，品质差，加上近年来，猕猴桃病虫害高发，稍有不慎就会造成减产减收，挫伤种植户的积极性。由于传统品种有所退化，品质参差不齐，市场价格时高时低，品牌战略难以推进，规模效益很难实现。因此，为规范猕猴桃产业健康发展，实现规模效益和品牌效益，加强猕猴桃抗病抗逆新品种选育，对猕猴桃传统产业改造升级刻不容缓。 1猕猴桃抗病抗逆新品种选育 1．1技术背景 猕猴桃是典型的呼吸跃变型果实，研究发现：乙烯对于猕猴桃等呼吸跃变型果实的成熟具有举足轻重的作用，通过控制猕猴桃果实内乙烯的生成可有效延长猕猴桃贮存的时间。在乙烯生物合成的过程中，有三个酶起着相当重要的作用，分别为：腺苷蛋氨酸合成酶（SAM?synthetase,SAMS)、ACC合成酶（ACC?synthase,ACS)、ACC氧化酶(ACC?oxidase,?ACO)，其中ACO在乙烯生物合成过程中特别关键，通过调控ACO基因及其表达，就可以很好的控制果实内源乙烯的合成，从而达到延长果实贮藏时间的目的。大多数采用转基因方法获得的耐贮猕猴桃新品种均带有筛选标记，随着转基因植物研究的深入和转基因作物的大规模产业化，转基因植物的安全性越来越受到人们的重视，带有筛选标记的转基因植物品种由于潜在的各种安全性问题，特别是由于抗生素筛选标记引发的转基因食品安全性问题，目前无法通过国家审查。因此，开发获得无筛选标记的耐贮猕猴桃转基因植株，对于耐贮猕猴桃新品种的选育和转基因植物安全都具有重要意义。 1．2抗病抗逆新品种选育过程 近年来，我公司依托XX大学和XXX院的技术力量和精准扶贫帮扶对接优势，在我公司基地内开展了“XXX号”猕猴桃新品种选育试验。本方法的特点是将选择标记基因和目的功能基因分别构建到一个双元表达载体的两段不同T_DNA上，经农杆菌介导的遗传转化将目的基因和选择标记基因整合到同一染色体的不同部位，通过后代的筛选，获得无选择标记的转基因植株。该方法获得的耐贮猕猴桃品种安全性高，易于通过国家农业部审查。具体方法为： （1）ACO基因的获得。从猕猴桃叶片中提取RNA，再将RNA反转录成cDNA，最后通过设计引物获得ACO基因。 （2）将ACO基因反向连接入双右边界双元载体，将载体转化入农杆菌中，通过叶盘转化法导入愈伤组织中，再通过筛选培养基获得抗性愈伤组织，经过分化培养基培养获得含有筛选标记再生苗。双右边界双元载体是指载体有一条左边界和两条右边界，其中标记基因在左边界和第一条右边界链接，目的基因是在第一条右边界和第二条右边界之间。 （3）上游引物为TermF:5′-GGT,GCT,TTC,CCA,GTC,CAA,ATC,GTT-3′，下游引物为Term?R:?5′-CCA,GGT,TTA,GTC,GTC,TCG,TGT,CTG,GT-3′，进行PCR扩增，80－105℃预变性3－10min后运行下循环，94℃?35?s，59℃?35?s，72℃?40?s，共35个循环，最后72℃?10?min，25℃?30?s，取PCR产物5－30?μL进行0.6%－1.5％琼脂糖凝胶电泳分离获得阳性植株（含有目的基因的植株，575bp）。 （4）通过遗传分离获得无筛选标记的含有目的基因的植株，将同时含有hpt基因和aco基因的共转化植株转移至温室栽培，随机挑选其中10－50个T0代植株进行自交产生T1代后对T1代植株的基因组DNA进行PCR检测，从而获得无筛选标记的含有目的基因的植株，含有目的基因的植株即为新的耐贮猕猴桃品种。 1．3新