其它的标记免疫分析技术应用.pptVIP

夹心法为例 直接化学发光免疫分析 化学发光酶免疫分析（chemiluminescence enzyme 　immunoassay，CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体，在与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物(发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。 二、化学发光酶免疫分析 该分析系统采用辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体(或抗原)，在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶（HRP）标记抗体复合物，这时加入鲁米诺发光剂、H2O2和化学发光增强剂使产生化学发光。 （一）HRP标记的CLEIA 该分析系统以碱性磷酸酶 标记抗体(或抗原)，在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，这时加入AMPPD发光剂，碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。 （二）ALP标记的CLEIA 增强发光酶免疫分析(enhanced luminescence enzyme immunoassay, ELEIA ) 在发光系统中加入增强发光剂, 如对2碘苯 酚等, 以增强发光信号, 并在较长时间内保持稳定, 便于重复测量, 从而提高分析灵敏度和准确性。 （三）增强发光酶免疫分析 电化学发光免疫分析（electrochemiluminescence immunoassay，ECLIA） 是以电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体(抗原)，以三丙胺(TPA)为电子供体，在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应，它包括电化学和化学发光两个过程。 三、电化学发光免疫分析 （一）电化学发光原理 在电化学发光免疫分析系统中，磁性微粒为固相载体包被抗体(抗原)，用三联吡啶钌标记抗体(抗原)，在反应体系内待测标本与相应的抗原 (抗体)发生免疫反应后，形成磁性微粒包被抗体-待测抗原-三联吡啶钌标记抗体复合物，这时将上述复合物吸入流动室，同时引人TPA缓冲液。当磁性微粒流经电极表面时，被安装在电极下面的电磁铁吸引住，而未结合的标记抗体和标本被缓冲液冲走。与此同时电极加压，启动电化学发光反应，使三联吡啶钌和TPA在电极表面进行电子转移，产生电化学发光，光的强度与待测抗原的浓度成正比。 （二）电化学发光免疫分析 电化学发光免疫测定示意图 1.免疫标记技术日益融合 （1）蛋白质、激素和肿瘤检测 （2）病毒、毒物检测 （3）其它方面应用 2.与生物化学固定化技术日益融合 3.与微细加工技术日益融合 （三）电化学发光免疫分析的应用与发展 ①敏感度高，甚至超过RIA； ②精密度和准确性均可与RIA相比； ③试剂稳定，无毒害； ④测定耗时短； ⑤测定项目多； ⑥已发展成自动化测定系统。 四、在医学检验中的应用 返回章目录 THANK YOU FOR YOUR ATTENTION! 返回总目录 * * * * * * 二、斑点金免疫渗滤试验 （一）原理 （二）试验方法 技术要点 　　1）将反应板平放于实验台面上，于小孔内滴加含待测抗原标本1～2滴，待完全渗入，与膜上的抗体反应而结合在膜上。　　2）于小孔内滴加胶体金标记抗体试剂1～2滴，待完全渗入，使胶体金标记抗体与结合在膜上抗原反应。　　3）于小孔内滴加洗涤液2～3滴，待完全渗入，洗去未结合的胶体金标记抗体。　　4）结果观察 在膜中央有清晰的淡红色或红色斑点显示者判为阳性反应，反之则为阴性反应。斑点呈色的深浅相应地提示阳性强度。 三、 斑点金免疫层析试验 （一）原理 （二）试验方法 （一）原理 斑点免疫层析试验 （dotimmunochromatographic assay，DICA） 简称免疫层析试验（ICA），也以硝酸纤维素膜为载体，但利用了微孔膜的毛细血管作用，滴加在膜一端的液体慢慢向另一端渗移，如同层析。 （二）试验方法  免疫层析试验以单克隆双抗体夹心法为例。 四、 临床应用及评价 免疫胶体金技术的发展前景自免疫胶体金层析技术作为诊断试剂广泛应用到临床后，由于它的快速简便、准确，具有高度特异性和高敏感性，结果直观可靠，而且试剂和样品用量极少，每个样品只需1～2μl,无需仪器设备，简化了烦琐的常规操作过程，同时也减小了因操作引起的误差，是一种目前发展最快的复合型免疫层析技术。在临床医学检验广泛应用，新项目正在不断发展