细胞核全能性与动物克隆.ppt

第九章 细胞核全能性与动物克隆 第一节 细胞核全能性研究发展过程 第二节 细胞核全能性的理论和研究 第三节 细胞分化与发育潜能变化 第四节 动物克隆的方法 第一节 细胞核全能性研究发展过程 第一个提出对动物细胞核进行移植实验的是诺贝尔奖获得者德国胚胎学家Spemann博士，1938年提出设想“把蝾螈卵细胞核取出，然后把一个囊胚细胞核放入卵中”。但由于技术等原因，没有人能够完成这个实验。 1952年，美国学者Rriggs和King利用蛙卵作出了上述实验。有些发育到蝌蚪，有些发育为成体。1958年，英国学者约翰利用爪蟾原肠内层细胞核移植，培育出成体爪蟾。1970年，用青蛙脚蹼角质化细胞进行移核实验，发育成蝌蚪。 1981年Illmensec和Hoppe用小鼠囊胚内细胞团细胞核移入去核受精卵，得到幼鼠，世界上第一例哺乳动物克隆的报道。 1995年Wilmut和Campbell用经体外培养的绵羊胚胎细胞做核供体，获得第一例分化细胞克隆羊。 1997年Wilmut等利用成体母羊的乳腺细胞作核供体，获得真正意义的体细胞克隆羊“多莉”。 2007年美国、中国科学家克隆猕猴（灵长类），但只到胚胎，没有成体。 纯系灰色小鼠做核供体，纯系黑色小鼠为核受体。 正常交配后第4天，从雌鼠中收集胚泡，去掉透明层，使内细胞团（ICM）与滋养层（TE）分离； 在胰酶作用下将ICM分散成单个细胞； 将黑鼠受精卵中雌雄原核吸出； 将ICM细胞核移植到去核的黑色小鼠的受精卵中； 胚胎在试管中培养4天到囊胚期； 胚胎植入母鼠子宫中。 结果：成活3只，2雌1雄。 毛色、核型及葡萄糖磷酸同工酶均于核供体表型。 以后有许多学者重复这个工作，都没有成功。人们对其真假产生怀疑。事实是因为小鼠胚胎激活较早，2细胞时就有合子的基因组表达，所以去分化被认为是小鼠克隆能否成功的关键。 人类的克隆研究也正在进行中。涉及到伦理问题，所以受到限制。分为生殖克隆和治疗克隆。 我国科学家的研究（50-60年代） 1、金鱼囊胚细胞核移植到金鱼卵中。 2、金鱼与其他鱼囊胚细胞和卵细胞核的交换。 3、黑斑蛙成体红细胞核移入去核的未受精卵内，卵子最后发育为蝌蚪。 4、鲫鱼囊胚细胞培养59代，将此细胞核移植到同种鲫鱼未受精卵中，培育出成体鲫鱼。 5、将鲫鱼囊胚细胞核移植到鲤鱼去核未受精卵中，实现不同种间的核质杂交。 第二节 细胞核全能性的理论和研究 一、细胞分化是遗传物质丢失（这个观点目前看不正确） 二、分化细胞遗传物质没有发生改变?? 三、细胞核全能性和细胞全能性不同 一、细胞分化是遗传物质丢失 （这个观点目前看不正确） 1885-1888年，Weismann和Roux等通过实验提出不同分化细胞含有的遗传物质是不同的。如用针烧蛙2细胞胚胎中的一个，结果另一个发育成半个胚胎，目前已清楚这是由于烧伤对另一个细胞有损伤。如果剧烈摇动海胆胚胎，让其解离成单个细胞，细胞都能发育为完整个体。Roux发现的马蛔虫染色体消减现象只是个别动物。 ? ????? 二、分化细胞遗传物质没有发生改变 1901-1903年Spemann用婴儿头发结扎蝾螈受精卵，将第一次卵裂形成的分裂球分开，结果每个分裂球都发育成一个正常而较小的胚胎。多数动物在细胞有丝分裂过程中，保证细胞核的遗传物质在2个子细胞中均等分配，子代细胞的染色体数目与遗传信息与受精卵是完全相同的。 三、? 细胞核全能性和细胞全能性不同 细胞核全能性：体细胞、胚胎细胞等细胞核具有与合子核相同的全套染色体组，具有发育成一个完整个体所需要的全部遗传物质。通过核移植可以证实。 细胞全能性：细胞能分化为各种细胞并形成一个完整有机体的能力。受精卵和早期胚胎。 第三节 细胞分化与核发育潜能变化 一、细胞分化和核基因差异表达 二、分化细胞与受精卵基因组的等值性 一、细胞分化和核基因差异表达 细胞分化的实质是组成有机体的不同类型的细胞合成不同类型的特异性蛋白质，即某种类型的细胞仅有部分基因被激活，约占全部基因的3-5%。 真核细胞的基因可以分为2类： 管家基因：在所有细胞中都表达的一类基因。奢侈基因：在不同细胞中专一的有选择性的表达。细胞分化就是这些基因表达的结果。 二、分化细胞与受精卵基因组的等值性 在细胞分化过程中发生染色体数量的变化只是个别现象。如马蛔虫。雄蜂（1n）是由没有受精的单倍体卵发育而来的。 普遍现象 分化细胞与受精卵DNA含量没有变化。如牛不同组织DNA含量：肝6.4ng，脾6.8ng，胰6.6ng，精子3.3ng。 染色体数量没有变化。如Puck检查人体8种组织1825个不同类型细胞，发现除2个细胞染色体数分别为45和47外