原核基因表达调控模式（下）.ppt

第五章 基因的表达与调控(上) －－原核基因表达调控模式 5.3 色氨酸操纵子的调控模式 色氨酸操纵子(tryptophane operon)负责色氨酸的生物合成，当培养基中有足够的色氨酸时，这个操纵子自动关闭，缺乏色氨酸时操纵子被打开，trp基因表达。 色氨酸或与其代谢有关的某种物质在阻遏过程（而不是诱导过程）中起作用。 色氨酸的合成分5步完成。每个环节需要一种酶，编码这5种酶的基因紧密连锁在一起，被转录在一条多顺反子mRNA上，分别以trpE、trpD、trpC、trpB、trpA代表 编码了邻氨基苯甲酸合成酶、邻氨基苯甲酸磷酸核糖转移酶、邻氨基苯甲酸异构酶、吲哚甘油-3-磷酶合成酶和色氨酸合成酶。 trpE基因是第一个被翻译的基因。trp操纵子中产生阻遏物的基因是trpR，该基因距trp基因簇很远， 色氨酸操纵子包括色氨酸合成途经中相关的5个结构基因。该操纵子编码一个转录单元，从色氨酸启动子Ptrp和操纵基因位点Otrp向下游转录。 5.3.1 trp操纵子的阻遏系统 trpR基因产物被称为辅阻遏蛋白(aporepressor)。 除非培养基中有色氨酸，否则这个辅阻遏蛋白不会与操纵区结合。 辅阻遏蛋白与色氨酸相结合形成有活性的阻遏物，与操纵区结合并使之关闭转录trp mRNA。 色氨酸操纵子属于一种负性调控的、可阻遏的操纵子（repressible operon），即这操纵子通常是开放转录的，有效应物（色氨酸为阻遏剂）作用时则阻遏关闭转录。 色氨酸辅阻遏蛋白 独立的操纵子trpR编码的产物---色氨酸辅阻遏蛋白，能与色氨酸操纵子的操纵基因位点特异性相互作用。 操纵基因序列是色氨酸辅阻遏蛋白的结合位点。操纵基因序列有部分对称序列。操纵基因的部分对称序列与色氨酸启动子序列在-21和+1碱基之间重叠。色氨酸辅阻遏蛋白能结合色氨酸并且只有当它与色氨酸结合形成复合物后才能结合到操纵基因上。 阻遏蛋白的结合位点 trpO -21 ~ +1， 活性阻遏物与trpO 的结合与RNA pol与启动子的结合发生竞争 阻遏系统 主管转录是否启动， 在缺乏Trp时， mRNA起始合成，但不能自动延伸，一般在trpE之前终止转录 在trp mRNA 5‘端trpE基因的起始密码前有一个长162bp的mRNA片段被称为前导区。 研究发现，当mRNA合成起始以后，除非培养基中完全没有色氨酸，转录总是在这个区域终止，产生一个仅有140个核苷酸的RNA分子，终止trp基因转录。 弱化子是一个不依赖ρ因子的终止子区城，在发夹结构之后是8个连续的U残基。 如果能在mRNA中形成发夹结构，就可以作为一个高效的转录终止子，只有140bp的转录物被合成。如果弱化子缺失，转录将被通读，结构基因将被转录。 前导肽 分析前导序列，发现它包括起始密码子AUG和终止密码子UGA，编码了一个14个氨基酸的多肽。这个假设的多肽（还未实际观察到）被称为前导肽。 该多肽有一个特征，其第10位和11位有相邻的两个色氨酸密码子。这两个相连的色氨酸密码子调控了蛋白质的合成。 前导肽14aa  前导RNA结构 色氨酸操纵子RNA的前导序列含有4个序列互补区，能形成不同的碱基配对的RNA结构。它们被称为序列1、2、3和4。 弱化子发夹结构是序列3和4配对的产物 (3:4结构)。序列1和2也是互补的，能形成另一个发夹结构1:2。 然而序列2还和序列3互补。如果序列2和3形成2:3发夹结构，3:4弱化子发夹结构就不能形成，转录就不会终止。 序列分析发现，其中4个片段进行配对，形成不同的二级结构 色氨酸是稀有氨基酸；通常两个色氨酸密码子连续出现的可能性很小，在色氨酸含量很低的情况下核糖体将会在这个位点停滞。前导肽的作用就是决定色氨酸的含量并控制转录的终止。 弱化作用 由于色氨酸 (色氨酸操纵子合成的酶的最终产物)是翻译过程中所必需的，因此细胞对它的含量很敏感，它决定了在mRNA中终止子(3:4)发夹结构是否形成。 当色氨酸缺乏时，翻译过程中将缺少其氨酰－tRNA，翻译通过两个相邻色氨酸密码子的速度就会很慢，当4区被转录完成时，核糖体才进行到1区（或停留在两个相邻的色氨酸密码子处），这时的前导区结构是2-3配对，不形成3-4配对的终止结构，所以转录可继续进行，直到将trp操纵子中的结构基因全部转录。 当培养基中色氨酸浓度较高时，核糖体可顺利通过两个相邻的色氨酸密码子，在4区被转录之前就到达2区，使2-3区不能配对，3-4区自由配对形成基一环终止子结构，转录被终止，trp操纵子被关闭。 这一过程被称为弱化作用。 因此终产物色氨酸含量的高低决定了转录是提早终止 (弱化)，还是继续转录完整个操纵子。 弱化子对基因活性的影响 在这种调节方式中，起信号作用的是有特殊