略略牛结核病γ.docVIP

附件2（略） 附件3（略） 附件4 牛结核病γ-干扰素ELISA检测试剂盒等5种兽药产品说明书和内包装标签 一、牛结核病γ-干扰素ELISA检测试剂盒说明书和内包装标签 （一）牛结核病γ-干扰素ELISA检测试剂盒说明书 兽用 【兽药名称】 通用名 牛结核病γ-干扰素ELISA检测试剂盒 商品名 无 英文名 Bovine Tuberculosis IFN-γ ELISA Test Kit 汉语拼音 Niujiehebing γ-ganraosu ELISA Jiance Shijihe 【主要组份与含量】 组份 数量/单位/规格 单抗包被板 2块（96孔/块） 牛结核菌素 1管（1.2ml /管） 禽结核菌素 1管（1.2ml /管） 阳性对照 1管（1ml/管） 阴性对照 1管（1ml/管） 兔抗牛γ-干扰素多克隆抗体 1瓶（20ml/瓶） 羊抗兔酶标二抗 1瓶（20ml/瓶） 20倍浓缩洗涤液 1瓶（45ml/瓶） 底物溶液A 1瓶（10ml/瓶） 底物溶液B 1瓶（10ml/瓶） 终止液 1瓶（10ml/瓶） 说明书 1份 【作用与用途】 用于牛结核病的辅助诊断。 【用法与判定】 1 样本制备 待检样本按如下方法制备： 1.1 采血 无菌采集牛结核病阳性或阴性牛全血5ml，肝素钠抗凝，室温条件下36小时内送达实验室进行刺激培养。培养试验开始前准备无菌清洁的2ml平底离心管和无菌PBS。 1.2 血液分装 分装前应将装有抗凝血的采血管上下轻轻颠倒5～10次，充分混匀血液样本。将每份抗凝血加入3个2ml离心管中，1ml/管。 1.3 抗原刺激 将牛结核菌素（bPPD）、禽结核菌素（aPPD）工作液（2种刺激抗原）和 PBS（无刺激抗原对照）各100μl分别按无菌操作加入1.2项中的3支离心管中。盖严，轻轻摇动离心管，使血液与刺激抗原或PBS充分混合，置37℃培养箱中培养16～20小时， 1.4 样本贮存 如果不立即检测上述血液培养上清，可收集后低温保存，检测时先将样本恢复至室温。上清在2～8℃可保存7日，在-20 2 试剂配制（临用前配制） 2.1 PBS（0.01mol/L，pH值7.4，下同）：称取氯化钠8g、氯化钾0.2g、磷酸氢二钠（含12个结晶水）2.9g、磷酸二氢钾0.2g，加蒸馏水800ml溶解，用1mol/L的氢氧化钠溶液和1mol/L的盐酸溶液调pH值至7.4，加蒸馏水定容至1000ml，经121℃高压 2.2 结核菌素工作液配制 使用前，将牛结核菌素（bPPD）和禽结核菌素(aPPD)做5倍稀释，即结核菌素与无菌PBS按1:4比例混合。 2.3 洗涤液配制 使用前，将20倍浓缩洗涤液恢复至室温（20～25℃），并摇动混匀（也可在37℃水浴中加热5～10分钟），然后用蒸馏水作20倍稀释，混匀，置2～ 3 操作步骤 3.1 取出单抗包被板，平衡至室温（根据样本多少，可拆开分次使用），按样本布局表（以90份样本为例）加入刺激后的血液培养上清样本，100μl/孔；另外设阳性对照（PC）、阴性对照（NC）各2孔，100μl/孔。置37℃ 样本布局表 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A S1bPPD S1aPPD S1PBS S2bPPD S2aPPD S2PBS S3bPPD S3aPPD S3PBS S4bPPD S4aPPD S4PBS B S5bPPD S5aPPD S5PBS S6bPPD S6aPPD S6PBS S7bPPD S7aPPD S7PBS S8bPPD S8aPPD S8PBS C S9bPPD S9aPPD S9PBS S10bPPD S10aPPD S10PBS S11bPPD S11aPPD S11PBS S12bPPD S12aPPD S12PBS D S13bPPD S13aPPD S13PBS S14bPPD S14aPPD S14PBS S15bPPD S15aPPD S15PBS S16bPPD S16aPPD S16PBS E S17bPPD S17aPPD S17PBS S18bPPD S18aPPD S18PBS S19bPPD S19aPPD S19PBS S20bPPD S20aPPD S20PBS F S21bPPD S21aPPD S21PBS S22bPPD S22aPPD S22PBS S23bPPD S23aPPD S23PBS S24bPPD S24aPPD S24PBS G S25bPPD S25aPPD S25PBS S26bPPD S26aPPD S26PBS S27bPPD S27aPPD S27PBS S28bPPD S28aPPD S28PBS H S29bPPD S2