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7.1 微生物的生长;一、获得纯培养的方法;一、获得纯培养的方法;1、稀释平皿分离法;涂布平皿法;2、平皿划线分离法;;3、选择性培养基的利用;二、细菌群体生长的测定;(一)细胞数量的测定; 1、显微直接计数法;2、比浊法;活菌数量的测定
1、稀释平板测数法
2、最大概率法(MPN法)
3、浓缩法;1、稀释平板测数法;2、最大概率法;测定细胞干重法
单位体积培养物中细胞物质的干重
含氮量测定法
微生物细胞中蛋白质的含量是比较稳定的,测出微生物细胞中的含N量后再换算出蛋白质的含量,可用凯氏定N法 。
蛋白质的含量=氮量×6.25
DNA含量的测定
ATP含量的测定
代谢活性法;7.2 细菌群体的生长;菌数的对数;Growth Cycle of Populations; 在这个时期内,菌体体积增长较快,如巨大芽孢杆菌可以从3.4μm增长到9.1—19.8μm。细胞内原生质比较均匀一致,贮藏物质消耗,DNA含量提高,产生各种诱导酶,在这个时期的后阶段,菌体细胞逐步进入生理活跃期,少量菌体开始分裂,曲线稍有上升。
滞留期的长短,因菌种和培养条件不同而异,几分钟到几小时不等。不同微生物的适应期不同 ; 在该时期,细胞代谢活性最强,细胞的数量呈几何级数上升,生长曲线表现为一条上升的直线;细菌在对数期每分裂一次所需要的时间称为世代时间,简称代时,用G表示
Nt = N02n ( Nt = 对数期t时细菌数 ;N0 = 对数期开始细胞数;n = 繁殖世代数.)
n = ( log Nt ? log N0 ) /log 2
= 3.3 (log Nt? log N0)
G = t/n = t/3.3 (log Nt? log N0)
= 0.301 t/ (log Nt? log N0) ;在衰亡期,有的细胞开始自溶,产生或释放出一些产物,如aa、抗生素、转化酶、短肽酶等。菌体形状呈多形态,大小不一,甚至畸形,细胞质内多液泡,有些G+变为G—。;7.3 真菌的生长;丝状菌的生长繁殖;;7.4 二次生长 、同步生长;;7.5 连续培养;恒浊连续培养
通过光电装置自动测定并籍以调节加入培养基的流速来保持培养物浊度,即菌数恒定的方法
恒化连续培养
通过控制培养液的流速来保持培养物的恒定生长速度和养料成分的培养方法
在培养需要一种低浓度的限制营养因子,通过调节其浓度的方法来获得具???不同生长速度的培养物,常用于模拟和研究微生物在自然状态养料稀薄下的生长规律; 分批培养中限制性营养物与生长速率(实线)、生长量(虚线)之间的关系;限制性营养物在低浓度时对微生物的生长带来影响; 稀释率由流速和培养器容量决定,因此,用1000ml 的容器,流速控制在500ml/hr ,稀释率则为0.5hr-1
稀释度过高时,由于培养物被冲走,生长不能维持在平衡态;7.6 环境对微生物生长的影响;一、 温度对微生物生长的影响; 根据微生物所适应的最适生长温度通常把微生物分为高温型、中温型和低温型; 同一种微生物在生长发育的不同阶段,对温度的要求不一样。如:;不同的微生物对高温的敏感性不同:
多数细菌,酵母,霉菌的营养细胞和病毒:50—65℃ 10分
钟可致死
放线菌,霉菌的孢子比较耐热 76—80℃ 10分钟致死
细菌的芽孢有抗热性,致死温度和时间视菌而定:
炭疽芽孢杆菌 105℃ 5—10分钟致死
枯草芽孢杆菌 100℃ 6—17分钟致死
肉毒梭菌 120—121℃ 10分钟致死;同一个菌的不同菌龄其抗热性也不相同,一般幼龄菌比老龄菌对温度敏感 ; 高温能杀死微生物,因此在微生物方法中常采用加热培养器皿和培养基方法灭菌
;微生物的致死温度:在一定时间内(如10分钟)杀死微生物所需要的最低温度称为微生物的致死温度
微生物的致死时间:在一定温度下,杀死微生物所需要的时间;温度越高,致死时间越短
D值:在特定温度下使微生物菌数减少10倍所需的时间
灭菌:杀死所有微生物的方法,包括细菌的芽胞
消毒:杀死微生物的营养体,而不能杀死芽胞的方法
防腐:抑制微生物的生长,但并不杀死微生物的方法
化疗:杀死寄主内的病原菌的方法;低温对微生物的影响;二、水份和渗透压;2. 渗透压;三、氢离子浓度(pH值); pH值影响微生物生长的主要作用在于:
⑴ 引起细胞膜电荷的变化,从而影响了微生物对
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