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微生物技术在环境领域中的新应用Application of microbial technology in environments 王志平wangzply@sjtu.edu.cn;主要内容;一、固定化酶与固定化微生物Immobilization enzyme and microbes;酶的化学本质;酶催化反应的特性;酶催化反应的缺陷;改进措施—固定化酶; 1953年，Grubhofev和Schleith首先开始了 酶固定化研究，并第一次实现了酶的固定化。 1960年，日本的千畑一郎开始了氨基酰化酶固 定化研究，开始了将固定酶应用在工业上的第 一步。 1969年，千畑一郎成功地将氨基酰化酶反应用 于DL-AA???光学分析，实现了酶连续反应的工业 化。这是世界上固定化酶用于工业的开端。 1973年，千畑一郎再次在工业上成功地固定化 大肠杆菌细胞，成功实现了L-天冬氨酸连续生 产。;酶的固定化;酶的分离纯化;酶的来源;Enzyme EC ;Enzyme ;酶的固定化方法;固定化方法 酶和细胞固定化方法 载体结合法 交联法 包埋法 网格型 微囊型 物理吸附法 离子结合法 共价结合法 热处理（细胞） ;吸附法（adsorption）;影响吸附法固定酶稳定性的因素;吸附法的特点;包埋法(entrapment);包埋法的特点;共价结合法(Covalent);共价结合的影响因素;共价载体的选择;共价偶联法的优缺点;形成共价结合的偶联类型;重氮法--1;重氮法--2;重氮法--3;重氮法--4;重氮法--5;重氮法--6;卤代烃烷基化--1;卤代烃烷基化--2;卤代烃烷基化--3;卤代烃烷基化--4;卤代烃烷基化--5;芳香烃化--6;芳香烃化--7;缩合法;芳香氨异硫氰反应;酸酐反应;活化酯法;含醛基高聚物;交联法;交联法的类型;交联法的优缺点;固定化酶制备方法的特点;固定化方法与载体的选择;固定化酶的特点;固定化酶的酶活力;酶固定化效果的测定;由于在固定化中酶往往会有些失活，因此，测定残留活力还不能正确反映与载体结合的酶活力，所以，仍以测定蛋白量较为难确。在酶固定化操作中，当酶与载体结合后，用适量适当的缓冲液淋洗固定化酶，以洗除未固定的酶，收集洗脱液，并测定其中蛋白量(或酶活力)，即为残留的蛋白量(或酶活力)。;固定化酶的稳定性;;;固定化酶（细胞）对酶抑制剂（尿素）的稳定性变化;固定化酶（细胞）对pH稳定性变化;pH--酶活力关系;对蛋白酶的抵抗力提高氨基酰化酶在胰蛋白酶作用下活力仅存20％，而将其固定于DEAE—纤维素上在同样条件下仍有80％的活力。这可能是因为蛋白酶分子量大，受到空间位阻，不能进入固定化酶中； 对变性剂、抑制剂的抵抗能力提高氨基酰化酶与固定于DEAE—Sephadex的氨基酰化酶比较，前者在6mol、2mol胍、1％SDS和4mmol丙酮溶液中活力分别为9％、49％、1％和55％，而后者在相应溶液中活力则分别为146％、117％、35％和138％。; 固定化酶在操作中可以长期使用，半衰期(t1/2)，即酶活性达到原有酶活性一半时所需的时间)较长。半衰期可按下式计算：;部分固定化酶的半衰期;固定化酶的反应器类型;Batch Stirred tank reactor,BSTR;Continuous Stirred tank reactor,CSTR;Plug Flow reactor,PFR;Fluidized bed reactor,FBR;CSTR/Ultrfitration reactor,CSTR/UFR;Recycle reactor,RCR;固定化酶反应器的选择;固定化酶的形状;底物的物理性质;酶反应动力学特性;酶的稳定性;操作要求及反应器费用;固定化对酶反应系统的影响;构象改变和屏蔽效应;微环境的影响;分配效应;分配效应的影响;扩散效应;固定化酶的优点;固定化酶的缺点;固定化酶与固定化细胞的应用;固定化酶应用实例;固定化葡萄糖异构酶实例;固定化细胞法生产6-氨基青霉烷酸 技术路线 E.Coli 斜面 细胞 固定化细胞 青霉素G 转化液 滤液 6-APA 粗品;二、