细胞高密度灌流培养生物反应器优化.ppt

生产用动物细胞及细胞培养工程 生产用动物细胞 常见生产用细胞系 Industrial cell lines 细胞培养工程 Cell Culture Engineering 生产用动物细胞库 原始细胞库 为生产用动物细胞建立时较原始的细胞管，即融合细胞管、一次克隆及多次克隆的细胞管。 主细胞库/种子细胞库 由原始细胞库中建株细胞扩大培养而冻存的细胞种子。 无细菌、真菌、支原体及病毒外源因子污染? 单一来源的均质细胞 群体倍增水平尽可能低 生产细胞库/工作细胞库 经检定合格后的细胞按生产条件大量培养、冻存的细胞管，是提供生产用细胞的唯一来源。 无菌性和无细胞交叉污染的检查? 每次生产时取出复苏、扩增，不再回冻? 确定其最高使用的传代次数 复 苏 记 录 细胞培养工艺及设备 载体培养系统 通气搅拌生物反应器 细胞培养工艺及设备 细胞培养工艺及设备 批式培养模式 流加培养模式 灌流（连续）培养模式 细胞培养动力学方程 实际应用 实际应用 实际应用 实际应用 谢 谢 细胞培养工艺及设备 种子细胞库 方瓶及摇瓶放大 5L反应器放大 30L反应器放大 300L反应器放大 放大工艺路线及相关设备 细胞培养工艺及设备 摇床大规模筛选培养及放大系统 细胞培养工艺及设备 杂交瘤细胞灌流培养细胞生长及代谢图 细胞培养工艺及设备 细胞反应器培养参数监控 * * * * * 鸡胚细胞，猴肾细胞 WI-38，MRC-5二倍体细胞 CHO、BHK、Vero转化细胞 CHO-dhfr/EPO、BHK/IL-2重组细胞 原代细胞时期 二倍体细胞时期 连续细胞系时期 融合和重组细胞时期 生产用动物细胞历史发展 CHO ---- tPA, EPO, Antibodies, Factor VIII BHK ---- CD molecules, Factor VIII Human 293 cells, PER C6, Mouse C127 ---- Protein C, viral vectors for gene therapy Hybridoma, myelomas, SPO, NSO ---- Antibodies Vero ---- viral vaccines Normal diploid cells MRC-5, WI-38 ---- human vaccines 按生产工艺大量培养，应用生产用动物细胞表达生产制备特定生物制剂的过程。 Flask Spinner Bio reactor (Bench scale) Bio Reactor (Plant) Subculture Production culture Expansion WCB MCB 1mL → 100mL → 1L → 1Lx3 → 12L → 100L → 300L → 2KL→ 10KL Cell Culture Process 生产用动物细胞库构成 原始细胞库 （primary seed bank） 主细胞库 (master cell bank, MCB) 工作细胞库 (working cell bank, WCB) 目的： 保证生产用细胞稳定、质量、生物安全性 长期、稳定的生产出符合要求的高质量产品 新细胞系 原始细胞库 (2~5安瓿) 扩大 主细胞库(10~20安瓿) 质控 工作细胞库(40~100安瓿) 扩大培养 质控 终止培养 扩大一个安瓿 扩大一个安瓿 检疫实验室 培养方案 生产用动物细胞的三级细胞库系统 冻 存 记 录 动物细胞培养工艺是动物细胞表达生物技术产品的生产工艺。这种工艺的研究是利用动物细胞的生物代谢过程，通过相关培养设备及仪器，对其进行培养控制，解决工艺过程的共性与特性问题。 细胞大规模培养 单层静置贴壁培养 固定化培养 悬浮培养 转管及转瓶培养 旋转圆柱管培养 微（巨）载体培养 中空纤维灌注培养 固定（流化）床培养 包被细胞培养 生物反应器培养 其他 振荡培养 翻滚培养 旋转培养 滋养器装置 细胞通过贴附于带电荷的有机载体进行生长的系统称为载体培养系统。他可以通过增加载体数量增大细胞附着面积，使细胞能与培养基充分接触，利于细胞的生长。 贴附前 贴附后 细胞培养工艺及设备 在位通气搅拌生物反应器 通气搅拌生物反应器过程控制